PAF受體拮抗劑對(duì)肺纖維化的抑制作用和可能的作用機(jī)理.pdf

1、肺纖維化是肺部細(xì)胞外基質(zhì)蛋白過(guò)度聚集而引起的慢性肺部損傷的末期癥狀，其病理特征是肺泡上皮的損傷和成纖維細(xì)胞增殖，并形成成纖維細(xì)胞灶。本文建立了三種小鼠肺纖維化模型，研究了IFN-γ和本組研發(fā)的PAF受體拮抗劑0916對(duì)于肺纖維化的治療作用和可能的機(jī)理，并進(jìn)一步研究了PAF受體拮抗劑對(duì)成纖維細(xì)胞功能的影響。 本文首先用博來(lái)霉素、百草枯和環(huán)磷酰胺三種藥物誘導(dǎo)小鼠發(fā)生肺纖維化。方法是氣管內(nèi)滴注博來(lái)霉素溶液(5mg/kg)、腹腔注射環(huán)磷

2、酰胺(100mg/kg/次，每周兩次)，14天后處死動(dòng)物；一次性口服百草枯溶液(100mg/kg)，21天后處死動(dòng)物。14天后，病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組正常肺泡結(jié)構(gòu)明顯減少，肺泡間隔增寬，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡隔出現(xiàn)膠原纖維增生。經(jīng)過(guò)肺系數(shù)計(jì)算和羥脯氨酸、MDA、GSH等生化指標(biāo)的測(cè)定，初步判斷三種方法均可在一定程度上引起小鼠的肺纖維化。其中，氣管內(nèi)滴注博萊霉素造成的肺纖維化與空白對(duì)照組差異極顯著，口服百草枯和腹腔注射環(huán)

3、磷酰胺也可在一定程度上誘導(dǎo)肺纖維化，與空白對(duì)照組有明顯差異。 本文采用博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型來(lái)研究化合物0916以及IFN-γ對(duì)于小鼠肺纖維化的抑制作用。病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，0916(300mg/kg)組肺泡結(jié)構(gòu)破壞和肺纖維化程度明顯減輕，纖維化積分由2.60±0.55降至0.80±0.84，纖維組織明顯減少。0916(150mg/kg和300mg/kg)和IFN-γ(1×106U/kg)可以顯著降低肺纖維

4、化小鼠的肺系數(shù)、HYP含量、MDA含量，并使GSH和SOD的表達(dá)有所回升，對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型有顯著的抑制作用. 在此基礎(chǔ)上，本文用ELSIA、免疫組化和細(xì)胞學(xué)方法探討了化合物抑制小鼠肺纖維化的作用機(jī)理。結(jié)果表明，化合物0916可以減少肺纖維化發(fā)生早期巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞的募集，且與模型組相比差異顯著。與模型組相比，75mg·kg-1組小鼠肺組織勻漿中IFN-γ的表達(dá)有較明顯的升高，對(duì)TGF-β、TNF-a和

5、IL-1表達(dá)有抑制的趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著。與模型組相比，150mg·kg-1組和300mg·kg-1組小鼠肺組織勻漿中TGF-β、TNF-a、IL-1β等促進(jìn)肺纖維化發(fā)生的細(xì)胞因子的表達(dá)受到明顯的抑制，同時(shí)IFN-γ和SOD的表達(dá)顯著回升。結(jié)果顯示，化合物可以通過(guò)抑制TGF-β、TNF-a、IL-1等細(xì)胞因子的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)IFN-γ和SOD的表達(dá)，對(duì)小鼠肺纖維化起到抑制作用。 此外，本文用ELISA方法和生化方法研究了化合

6、物0916和BN52021對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響。MTF實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SiO2(50mg/L至300mg/L)可呈劑量依賴性的刺激成纖維細(xì)胞的增殖?；衔?916和BN52021可呈劑量依賴性的抑制SiO2(300mg/L)引起的成纖維細(xì)胞增殖，IC50分別為3.48×10-7mol/L和8.58×10-7mol/L。再者，本文用ELISA方法測(cè)定了成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-a、TGF-β三種促纖維化細(xì)胞因子的含量。結(jié)果顯

7、示，0916(1×10-8mol/L至5×10-6mol/L)和BN52021(1×10-8mol/L至1×10-5mol/L)可呈劑量依賴性的抑制培養(yǎng)上清中三種細(xì)胞因子的表達(dá)。本文分別用考馬斯亮藍(lán)法和生化方法測(cè)定了化合物對(duì)SiO2(300mg/L)刺激的成纖維細(xì)胞內(nèi)蛋白含量以及HYP和MDA的表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，0916(1×10-8mol/L至5×10-6mol/L)和BN52021(1×10-8mol/L至1×10-6mol/L