腺相關病毒載體AAV-hVEGF-,165-的構建及hVEGF-,165-與TGFβ1對椎間盤纖維環(huán)細胞的生物學效應.pdf_第1頁
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1、　　目的：構建人血管內皮生長因子(humanvascularendothelialgrowthfactor，hVEGF165)腺相關病毒(adeno-associatedvirus，AAV)載體AAV-hVEGF165，并體外檢測其在椎間盤纖維環(huán)細胞中的表達，以及觀察AAV-hVEGF165與AAV-TGFβ1(transforminggrowthfactorbeta1，TGFβ1)基因聯合轉染對纖維環(huán)細胞Ⅰ型膠原的生物學效應。探討應用

2、hVEGF165基因逆轉椎間盤退變可行性。　　方法：采用分子克隆技術，從pcDNA3(+)-hVEGF165質粒獲得hVEGF165cDNA，并克隆至AAV包裝質粒pSNAV上，構建成pSNAV-hVEGF165的AAV重組質粒，經酶切及測序鑒定正確，用脂質體介導pSNAV-hVEGF165轉染HEK293細胞和血管內皮細胞(VEC)，熒光免疫組化方法檢測hVEGF165蛋白，并用MTT法測定hVEGF165對VEC增殖的影響。由本元

3、正陽公司對鑒定正確的pSNAV-hVEGF165進行AAV-hVEGF165的包裝。AAV-hVEGF165與AAV-TGFβ1聯合轉染原代培養(yǎng)的椎間盤纖維環(huán)細胞，Westernblotting檢測hVEGF165與TGFβ1的表達以及纖維環(huán)細胞Ⅰ型膠原表達量的變化?！　〗Y論：構建的腺相關病毒載體AAV-hVEGF165可在體外表達，hVEGF165在體外能夠協同TGFβ1促進纖維環(huán)細胞Ⅰ型膠原表達的增加，hVEGF165有可能基因逆

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