發(fā)光桿菌誘變方法和發(fā)酵液抑菌活性的研究.pdf

1、本文對發(fā)光桿菌(Photorhabdus luminescens1029)抑菌活性進行了初步的研究，并探討發(fā)光桿菌高毒力菌株的選育方法。結(jié)果如下： 1.Photorhabdus luminescens 1029發(fā)酵液對供試的10種植物病原菌和枯草桿菌均具抑制作用，對真菌病害中的芒果擬莖點霉病菌和荔枝霜疫霉病菌抑制作用較強，EC<,50>分別為100倍和50倍稀釋液；對細菌中的馬鈴薯環(huán)腐病菌、枯草芽孢桿菌和煙草青枯病菌的抑菌作用較

2、強，中濃度對應(yīng)的抑菌圈直徑<,Ψ中>達到了15.08mm、9.64mm和8.10mm。表明Photorhabdus luminescens 1029發(fā)酵液具有廣譜抑菌活性。 2.用煙草青枯病菌作指示菌，探討了發(fā)酵時間、溫度、pH、紫外線和太陽光等環(huán)境因子對發(fā)酵液抑菌活性的影響。結(jié)果表明，pH7～9時發(fā)酵液抑菌作用最強；發(fā)酵液組分較復(fù)雜，既有耐高溫的組分也有對其敏感的組分；用紫外線照射在短時間內(nèi)表現(xiàn)出抑制作用，而隨著時間的延長，會

3、使發(fā)酵液抑菌活性增強，而太陽光對抑菌組分則表現(xiàn)出破壞作用；在發(fā)酵24～144h期間，于72h～84hEf發(fā)酵液具最強的抑制活性。 3.發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取，取油相，30～40℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，制得含抑菌組分的粗提物。將粗提物用100～200目的硅膠層析分離，得到4個組分，將活性組分進行MS和<'1>HNMR分析推測其化學本質(zhì)是2-isopropyl-5-(2-phenylethenyl)-benzene-1，3-diol，與R

4、ichardson等從Photorhabdus Iuminescens HK中分離出的抑菌成分相同，屬于羥化二苯乙烯衍生物。 4.采用烷化劑1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(NTG)作誘變劑，將其直接加到肉湯培養(yǎng)基中，控制濃度為10μg/ml，并加幾滴吐溫-80，使之乳化，在28℃、170r/min條件下培養(yǎng)24h完成突變。采用瓊脂塊高通量法初篩，搖瓶復(fù)篩，得到毒力效價提高12.82％的突變菌株，經(jīng)過遺傳穩(wěn)定性檢驗，能夠穩(wěn)定遺傳