異常Notch3通路在人卵巢癌發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、本文對(duì)異常Notch3通路在人卵巢癌發(fā)病機(jī)制中的作用進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：Jagged-1在人卵巢癌中被Notch3和WNT/β-catenin 途徑調(diào)控。卵巢癌是一種惡性度高，侵襲性強(qiáng)的惡性腫瘤。我們?cè)谥暗难芯抗ぷ髦?，已?jīng)證實(shí)了Notch3在人卵巢漿液癌中擴(kuò)增和表達(dá)上調(diào)，Notch 通路活性高低對(duì)于卵巢癌耐藥性亦有十分重要的意義。在Notch3的眾多配體中，Jagged-1在卵巢癌組織中表達(dá)最高，

2、而且Jagged-1與Notch3表達(dá)水平成正相關(guān)性。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了Jagged-1表達(dá)受Notch3 信號(hào)調(diào)控。沉默Notch3或與其互相作用的轉(zhuǎn)錄因子RBPjk，都能抑制Jagged-1在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)。在人類卵巢上皮細(xì)胞中外源性表達(dá)Notch3 胞內(nèi)段N3ICD或轉(zhuǎn)基因小鼠誘導(dǎo)過表達(dá)人Notch3，均可以上調(diào)Jagged-1表達(dá)。除此之外，抑制WNT/β-catenin 信號(hào)，也使Jagged-1表達(dá)降低。同時(shí)下調(diào)Not

3、ch3和WNT 信號(hào)對(duì)抑制癌細(xì)胞增殖和降低Jagged-1表達(dá)作用均明顯大于單一途徑抑制。綜上，在卵巢癌中，配體Jagged-1與受體Notch3 其存在正反饋的調(diào)節(jié)關(guān)系，Jagged-1 也同時(shí)被WNT/β-catenin 途徑調(diào)控。上述兩種配體調(diào)控途徑都能影響Notch3 信號(hào)途徑，導(dǎo)致卵巢腫瘤的發(fā)生。
　　 第二部分：運(yùn)用ChIP-chip芯片技術(shù)研究Notch3在人卵巢癌細(xì)胞中的調(diào)控機(jī)制。Notch 通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中

4、有著非常重要的作用，闡明Notch 信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制是了解此通路具體作用的基礎(chǔ)。應(yīng)用ChIP-on-chip 技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)了一系列基因啟動(dòng)子區(qū)域均結(jié)合有CSL/N3ICD 轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物。運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)分析后，發(fā)現(xiàn)一種新CSL 可結(jié)合序列“GTTGCCAT”。接下來的研究中，我們選擇一些可同時(shí)被γ-分泌酶抑制劑和Notch3 shRNA 抑制的基因作為Notch3 通路下游候選基因。在這些基因中，HURP 編碼產(chǎn)物由于參與細(xì)胞有絲

5、分裂過程，視為代表。當(dāng)Notch 通路抑制時(shí)，實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白免疫印跡分別檢測(cè)其mRNA和蛋白表達(dá)量均降低。凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）表明RBPjk 可以與其啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合。啟動(dòng)子熒光素實(shí)驗(yàn)表明無論是經(jīng)典的CSL 結(jié)合序列和新發(fā)現(xiàn)的結(jié)合序列均能影響基因表達(dá)。沉默HURP后，可使細(xì)胞停滯于G2/M 期從而抑制細(xì)胞增殖和裸鼠移植瘤成瘤性。外源表達(dá)HURP 可以部分削弱γ-分泌酶抑制劑或Notch3 shRNA 對(duì)于細(xì)胞增殖的抑制作用