14-3-3ζ、ER-β與SF-1基因啟動子區(qū)甲基化水平在子宮腺肌病中的作用及意義.pdf

1、目的:
　　通過對子宮腺肌病異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中14-3-3ζ、雌激素β受體(estrogen receptor beta, ER-β)與孤兒核受體類固醇生成因子1(steroidogenic factor-1, SF-1)基因啟動子區(qū)去甲基化狀況及細(xì)胞生物學(xué)功能改變的研究,為進(jìn)一步探討相關(guān)基因啟動子區(qū)去甲基化在子宮腺肌病發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　選擇因子宮腺肌病行子宮次/全切除術(shù)的患者,取其

2、異位內(nèi)膜組織標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組(術(shù)后病理組織學(xué)證實(shí)為子宮腺肌病),因輸卵管阻塞導(dǎo)致不孕癥行宮腹腔鏡檢查的患者,取其子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本為對照組,經(jīng)消化、濾網(wǎng)、差速貼壁等分離、純化培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞;RT-PCR及Western blot(WB)法檢測14-3-3ζ、ER-β與SF-1 mRNA和蛋白表達(dá)情況;甲基化特異性PCR(methylation specific PCR, MSP)法檢測14-3-3ζ、ER-β與SF-1基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài);

3、CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況,Transwell法檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力,流式細(xì)胞法檢測細(xì)胞周期與凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　(1)分離、純化培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定vimentin呈陽性,cytokeratin呈陰性;(2)RT-PCR及WB檢測結(jié)果顯示:14-3-3ζ、ER-β與SF-1 mRNA和蛋白在實(shí)驗(yàn)組間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)水平均顯著高于對照組間質(zhì)細(xì)胞;(3)MSP法檢測結(jié)果顯示:與對照組間質(zhì)細(xì)胞相比,在實(shí)驗(yàn)組間質(zhì)