冷刺激和LPS刺激誘導(dǎo)大鼠腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng).pdf

1、目的:
　　 觀察冷刺激和LPS刺激大鼠腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達(dá)的改變,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)冷刺激和LPS刺激與腎臟損傷的關(guān)系。
　　 方法:
　　 將126只SD大鼠隨機(jī)分為單純溫度變化及溫度變化+LPS刺激兩大組,每大組又隨機(jī)分為正常溫度、驟降溫至4℃和驟降溫至-16℃三組,每組均觀察1h、4h、8h、12h、24h、48h和7d七個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)3只動物。動物造模飼養(yǎng)環(huán)境溫度變化為在常溫下飼養(yǎng)7天后放入4℃/-16

2、℃條件氣候箱飼養(yǎng);用無熱源水配制LPS,按1mg/kg腹腔注射。分別于各時間點(diǎn)處死動物,切取左側(cè)腎臟。蘇木素-伊紅(HE)染色觀察其組織病理學(xué)變化,免疫組織化學(xué)方法測定葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)和Caspase12的表達(dá),圖像分析儀檢測其平均光密度(AOD)和積分光密度(IOD)。
　　 結(jié)果:
　　 H-E染色可見,腎臟組織病理學(xué)損傷隨著溫度的降低而加重,且損傷出現(xiàn)的時間也早。單純降溫組主要損傷腎臟大部分腎小管上

3、皮細(xì)胞,單純LPS組主要損傷腎臟大部分腎小球,而降溫+LPS組主要同時損傷腎臟腎小球和腎小管上皮細(xì)胞。降溫+LPS組比單純降溫組的腎臟組織病理學(xué)損傷嚴(yán)重。各降溫組均以24h點(diǎn)組織病理損傷最為嚴(yán)重。
　　 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,隨著溫度的降低,腎臟組織的GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)越多,且表達(dá)增多出現(xiàn)的時間也越早。單純降溫組和降溫+LPS組的GRP78和Caspase12蛋白均主要在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá),腎小球中也有

4、少量表達(dá)。單純LPS組的GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)與對照組相似,但降溫+LPS組的GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)較單純降溫組多。在1h、4h、8h、12h、24h、48h、7d等七個時間點(diǎn)中,各降溫組均以24h點(diǎn)GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)最多。
　　 通過全自動圖像分析儀分析腎臟的腎小球和腎小管上皮細(xì)胞中陽性染色顆粒的平均光密度、積分光密度,結(jié)果顯示隨著溫度的降低,單純降溫組腎臟組織內(nèi)GRP78和

5、Caspase12蛋白的表達(dá)較對照組多,各組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。在1h、4h、8h、12h、24h、48h、7d等七個時間點(diǎn)中,各降溫組均以24h點(diǎn)的GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)最多。另外,隨著溫度的降低,降溫+LPS組腎臟組織內(nèi)GRP78和Caspase12蛋白的表達(dá)量較常溫LPS組多,各組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。常溫LPS組腎臟組織內(nèi)GRP78和Caspase12表達(dá)量與對照組相似,而降溫+LPS組腎臟

6、組織內(nèi)GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)量較單純降溫組多。在1h、4h、8h、12h、24h、48h、7d等七個時間點(diǎn)中,各降溫組均以24h點(diǎn)的6RP78和Caspase12蛋白表達(dá)最多。
　　 結(jié)論:
　　 受冷刺激后,大鼠腎組織出現(xiàn)損傷性病理學(xué)變化和GRP78和Caspase12蛋白表達(dá)增加,隨時間而加重,24h時最明顯;單純1mg/kg LPS注射僅有輕度損傷性變化,LPS+冷刺激后,腎組織學(xué)損傷及GRP78、