FMR1基因敲除鼠腦組織GABA能中間神經(jīng)元的改變.pdf

1、 廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 1 縮略詞表 縮略詞表 英文縮寫 英文全稱 中文全稱 GABA gamma-aminobutyric acid γ-氨基丁酸 FMR1 fragile X retardation 1 脆性 X 智障基因 FXS fragile X syndrome 脆性 X 綜合征 FMRP fragile X mental retardat

2、ion protein 脆性 X 智力低下蛋白 PV paravalbumin 小白蛋白 GAD glutamate decarboxylase 谷氨酸脫羧酶 Nav1.1 Sodium channel,voltage-gated,alpha1 Ⅰ型電壓門控性鈉通道 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶鏈反應(yīng) KO FMR1 knockout mice 脆性 X 基因敲除鼠 WT W

3、ild type mice 野生型小鼠 GEFS＋ generalized epilepsy with febrile seizure plus 全面性癲癇伴熱性驚厥附加征 SMEI severe myoclonic epilepsy in infancy Dravet 綜合征 CB calbindin 鈣結(jié)合蛋白 CR calretinin 鈣視網(wǎng)膜結(jié)合蛋白 廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 3 于野生型（未發(fā)表資料）

4、。另外我們還研究出在 FMR1 敲除鼠海馬中抑制性中間神經(jīng)元上Ⅰ型電壓門控性鈉通道（Sodium channel,voltage-gated,alpha1, Nav1.1）上的電流密度降低。由此，我們推測(cè)在脆性 X 綜合征中，抑制性中間神經(jīng)元細(xì)胞面積增大， 導(dǎo)致鈉電流密度降低是使其抑制功能降低的重要因素。 本研究通過使用 GABA 特異性抗體標(biāo)記 GABA 能中間神經(jīng)元，通過比較 FMR1 敲除鼠與野生型小鼠腦組織中 GABA 能中間神

5、經(jīng)元數(shù)量及面積的差異，探討抑制性中間神經(jīng)元異常在脆性 X 綜合征癲癇發(fā)病的致病作用，為臨床尋找相應(yīng)的藥物治療等提供理論依據(jù)。 【材料與方法 材料與方法】 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 FVB 系小鼠飼養(yǎng)在 19~21℃自然光條件下，能自由獲取食物和水。分別選取生后 2 周、4 周、6 周雄性脆性 X 基因敲除鼠(Knockout mice, KO)和同齡野生型小鼠(Wild type mice, WT)，共 6 組，每組各 6 只小鼠。運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)

6、技術(shù)（Polymerase Chain Reaction，PCR）對(duì)其進(jìn)行基因型鑒定。 2.每只小鼠經(jīng)灌注固定以及切片 （30um） 后， 選取 4-6 張腦片 （距離前囟點(diǎn)﹣1.82到﹣2.06mm） ，使用 GABA 特異性抗體（1:800） ，DAB 染色法標(biāo)記 GABA 能中間神經(jīng)元。 3.使用 Leica 倒置顯微鏡采集免疫組織化學(xué)圖像 （20×） ； 用 Image pro plus 6.0 對(duì)GABA 陽(yáng)性神經(jīng)元

7、細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞面積數(shù)據(jù)進(jìn)行收集； SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，不同基因小鼠數(shù)據(jù)的比較使用兩獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)， 同種基因型小鼠數(shù)據(jù)比較使用單因素方差分析。 【結(jié)果 結(jié)果】 1.KO 和 WT 小鼠腦組織中 GABA 陽(yáng)性中間神經(jīng)元數(shù)量的比較 KO2w、KO4w 和 KO6w 小鼠梨狀皮質(zhì) GABA 陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量均小于同周齡WT 小鼠；在 KO4w 小鼠，CA3 區(qū)、DG 區(qū)和紋狀皮質(zhì) GABA 陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量也減少，差異具有統(tǒng)計(jì)