版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、脆性X綜合征(fragileXsyndrome,F(xiàn)XS)是一種常見的遺傳性智力低下性疾病,臨床表現(xiàn)主要有不同程度的智力障礙、青春期后巨大睪丸、部分患者有特征性面容,如長臉、招風(fēng)耳、高腭弓,以及自閉癥等精神行為異常。FXS是由脆性X智障基因(fragileXmentalretardation1,F(xiàn)MR1)中5端非編碼區(qū)CGG三核苷酸重復(fù)序列不穩(wěn)定擴(kuò)增及其異常甲基化,使FMR1基因失活,導(dǎo)致其編碼的產(chǎn)物—脆性X智力低下相關(guān)蛋白(fragil
2、eXmentalretardationprotein,F(xiàn)MRP)表達(dá)的缺失或減少引起。形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)脆性X綜合征患者和FMR1基因敲除小鼠樹突棘成熟和修剪障礙,樹突棘呈明顯瘦長、扭曲的幼稚形態(tài),不成熟的樹突棘形成突觸的能力嚴(yán)重受損。對(duì)FMR1基因敲除小鼠的電生理研究發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)代謝性谷氨酸受體(metabotropicglutamatereceptor,mGluR)所觸發(fā)的長時(shí)程抑制(Long-termDepression,LTD)延長,
3、長時(shí)程增強(qiáng)(Long-termPotentiation,LTP)不變。上述研究從結(jié)構(gòu)和功能兩方面都表明FMRP缺乏可導(dǎo)致突觸可塑性改變,故目前認(rèn)為其可塑性的改變是產(chǎn)生脆性X綜合征智能低下的主要機(jī)理,但是FMRP如何影響突觸可塑性至今仍不清楚。目前已知FMRP是一種mRNA結(jié)合蛋白,F(xiàn)MRP在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間穿梭,改變與其結(jié)合的mRNA的亞細(xì)胞定位,影響轉(zhuǎn)錄過程及翻譯后修飾,調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá),推測(cè)FMRP可能通過調(diào)節(jié)與神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能有
4、關(guān)的蛋白來影響突觸的可塑性,有研究表明在行為依賴的突觸活動(dòng)中FMRP的含量增高,也提示FMRP在突觸可塑性中起重要作用。由于樹突棘的改變是脆性X綜合癥的主要病理變化,且樹突棘是構(gòu)成哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性突觸傳遞的主要部位,因而尋找受FMRP調(diào)節(jié)的mRNA,并探討其編碼蛋白在樹突棘發(fā)育及突觸可塑性中的作用,對(duì)明確FXS的發(fā)病機(jī)制可能有重大意義。 近年新發(fā)現(xiàn)的棘相關(guān)的Rap三磷酸鳥苷酶激活蛋白(Spine-associatedR
5、apGAP,SPAR)被發(fā)現(xiàn)與樹突棘形態(tài)有關(guān)。已知樹突棘主要構(gòu)成興奮性突觸后膜,而SPAR也定位于突觸后膜。樹突棘的主要成分actin在維持棘的形態(tài)中起主要作用,研究表明SPAR具有與actin相聯(lián)系的結(jié)構(gòu)域(act1,act2),SPAR還可以通過結(jié)構(gòu)域GKBD與PSD-95相聯(lián)系,而PSD-95被發(fā)現(xiàn)與樹突棘密切相關(guān)。因此,我們有充足的理由推測(cè)SPAR與樹突棘密切相關(guān)。本研究擬通過觀察不同發(fā)育時(shí)期SPAR及SPARmRNA在小鼠腦組
6、織中的表達(dá)分布,探討SPAR在腦發(fā)育中可能的作用;并通過比較KO與WT小鼠腦組織中SPAR及SPARmRNA表達(dá)的不同,探討SPAR表達(dá)是否受FMRP的影響,為研究脆性X綜合癥的發(fā)病機(jī)理提供一定的依據(jù)。 [材料和方法]1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:本研究采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為FMR1基因敲除型(KO)純合子(-/-)及其野生型(WT)純合子(+/+)FVB近交系小鼠。 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基因型鑒定:用PCR法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠的FMR1基因片斷,用免疫印
7、跡法檢測(cè)FMRP的表達(dá)。 3.檢測(cè)SPAR在小鼠腦區(qū)的表達(dá)與分布:第一部分,用免疫組化和蛋白印記法觀察SPAR在小鼠腦區(qū)中的分布及表達(dá)。將小鼠分為成年(6周)KO組(KO6W組)、成年WT組(WT6W組)、幼年(1周)KO組(KO1W組)和幼年WT組(WT1W組)4組,每組10只。分別取每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦組織做冰凍切片,用生物素標(biāo)記、DAB顯色免疫組化法并在顯微鏡下觀察SPAR的分布及在海馬和皮層中的表達(dá)情況。分別提取每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海
8、馬、皮層的全細(xì)胞蛋白,進(jìn)行蛋白定量,將蛋白進(jìn)行電泳分離、轉(zhuǎn)膜,與SPAR抗體反應(yīng)后,應(yīng)用化學(xué)發(fā)光劑對(duì)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。第二部分,海馬神經(jīng)元培養(yǎng)后用蛋白印跡法檢測(cè)SPAR的表達(dá)。將新生小鼠分為KO組和WT組分布進(jìn)行海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng),共培養(yǎng)10批。培養(yǎng)到第7天后每組神經(jīng)元各取部分抽提蛋白,用蛋白印跡法檢測(cè)SPAR的表達(dá)。 4.檢測(cè)SPARmRNA在小鼠腦區(qū)中的分布和表達(dá):取小鼠分為成年(6周)KO組(KO6W組)、成年WT組(WT6
9、W組)、幼年(10天)KO組(KO10d組)和幼年WT組(WT10d組)4組,每組10只。分別取腦組織做冰凍切片,用地高辛標(biāo)記、DAB顯色原位雜交法檢測(cè)SPARmRNA的分布和表達(dá)。 5.圖像采集:免疫組化,原位雜交的結(jié)果用圖象分析儀分別對(duì)大腦皮質(zhì)、海馬的DAB顯色的平均光密度值(meanopticaldensity,MOD)進(jìn)行采集,蛋白印跡的結(jié)果用灰度分析軟件掃描所得蛋白質(zhì)條帶,得出SPAR表達(dá)圖像峰面積值,與β-actin
10、表達(dá)峰面積值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。 6.統(tǒng)計(jì):對(duì)兩個(gè)年齡組之間及兩個(gè)基因型之間海馬和皮層的平均光密度值及蛋白印跡所得的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)值用配對(duì)t檢驗(yàn)比較。用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P值小于0.05為差異有顯著性。 [結(jié)果]1.FVB小鼠腦區(qū)中SPAR的分布:SPAR在KO及WT小鼠各個(gè)腦區(qū)普遍表達(dá),尤其在海馬、皮層表達(dá)豐富。大腦皮質(zhì)中以紋狀皮質(zhì)、運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)、梨狀皮質(zhì)為主;海馬各區(qū)均有高密度信號(hào),以齒狀核為主;大腦的核團(tuán)中,在
11、第三腦室周乳頭體前核、丘腦、尾狀核、韁核、內(nèi)囊、杏仁核等處濃染;胼胝體上僅有少量分布。 2.SPAR的表達(dá):將不同基因型小鼠免疫組化、蛋白印跡法檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)KO6W組及KO1W中皮質(zhì)、海馬部位SPAR的表達(dá)均顯著低于野生型,在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中KO組SPAR表達(dá)顯著低于WT組。不同年齡組比較,KO1W組及WT1W組中皮質(zhì)、海馬部位SPAR的表達(dá)顯著高于KO6W組及WT6W組。P值均小于0.05。 3.SPAR
12、mRNA的表達(dá):不同基因型比較,KO6W組及KO10d中皮質(zhì)、海馬部位SPARmRNA的表達(dá)均顯著低于野生型。不同年齡組比較,KO10d組及WT10d組中皮質(zhì)、海馬部位SPARmRNA的表達(dá)顯著高于KO6W組及WT6W組。P值均小于0.05。 [結(jié)論]SPAR及SPARmRNA在FVB小鼠各個(gè)腦區(qū)中普遍表達(dá),在海馬、皮層等神經(jīng)元聚集處表達(dá)尤為豐富。在幼年小鼠中表達(dá)高而成年小鼠中降低,表明SPAR的表達(dá)與年齡相關(guān)。FMR1基因敲除
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Fmr1敲除小鼠海馬組織microRNA的差異表達(dá)及其功能研究.pdf
- FMR1基因敲除對(duì)雄性小鼠生殖功能的影響.pdf
- FMR1基因敲除鼠腦組織GABA能中間神經(jīng)元的改變.pdf
- NRG1-ErbB4信號(hào)在Fmr1基因敲除鼠腦組織中的改變及意義.pdf
- 電針“長強(qiáng)”穴對(duì)FMR1基因敲除小鼠海馬區(qū)PSd-95蛋白表達(dá)的影響.pdf
- 電針“長強(qiáng)”穴對(duì)FMR1基因敲除小鼠海馬區(qū)NLGN-3蛋白表達(dá)的影響.pdf
- GSK-3β、mTOR在Fmr1基因敲除小鼠脊髓水平的痛覺調(diào)制中的作用.pdf
- AKT-ERK-GAP43通路在Fmr1基因敲除小鼠海馬中的改變.pdf
- Fmr1基因缺失對(duì)雌性小鼠生殖功能的影響.pdf
- 與fmr1敲除小鼠異常發(fā)育相關(guān)的kv1.1表達(dá)、功能及rna編輯機(jī)制研究
- 柴胡桂枝湯揮發(fā)油對(duì)Fmr1基因敲除小鼠的治療作用和機(jī)制探討.pdf
- FMR1基因的可變剪接及其意義.pdf
- GABA能神經(jīng)元在FMR1基因敲除鼠癲癇發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf
- FMR-1基因敲除小鼠的焦慮及探索行為分析.pdf
- FMR1基因敲除小鼠聽源性癲癇的生化機(jī)制及其柴胡桂枝湯揮發(fā)油的干預(yù)作用.pdf
- mGluR5拮抗劑MPEP對(duì)FMR1基因敲除小鼠神經(jīng)元樹突棘的影響及機(jī)制探討.pdf
- 鉀通道功能調(diào)節(jié)參與1型代謝性谷氨酸受體介導(dǎo)的Fmr1基因敲除小鼠神經(jīng)元興奮性改變.pdf
- 煙堿型乙酰膽堿受體α7及其特異性激動(dòng)劑在Fmr1基因敲除小鼠學(xué)習(xí)記憶中的作用研究.pdf
- BRD7基因在小鼠各組織中的表達(dá)及基因敲除小鼠模型的構(gòu)建.pdf
- α-細(xì)辛醚對(duì)Fmr1小鼠跳臺(tái)行為及海馬Akt,GSK3β表達(dá)的影響.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論