毛竹Mariner-like轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座特性分析.pdf

1、轉(zhuǎn)座子(transposon,Tn),又叫轉(zhuǎn)座因子(transposable element, TEs)、跳躍因子、可移動(dòng)基因、跳躍基因,是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位,實(shí)質(zhì)是在細(xì)胞中能從同一條染色體上的一個(gè)位點(diǎn)“跳”到另一個(gè)位點(diǎn),或者從一條染色體轉(zhuǎn)移到另一條染色體上的DNA序列。
　　本研究將之前分離得到的兩個(gè)具有完整轉(zhuǎn)座酶結(jié)構(gòu)的毛竹 MLE轉(zhuǎn)座子 Phmar1和Phmar2和與之對(duì)應(yīng)的非自主的轉(zhuǎn)座子Phmar

2、1NA和Phmar2NA構(gòu)建到帶有綠色熒光蛋白基因的植物表達(dá)載體pBIN m-gfp5-ER上,然后通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)野生型擬南芥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。再對(duì)T1代植株進(jìn)行篩選和鑒定。利用熒光觀察和PCR擴(kuò)增的方法,在確定的轉(zhuǎn)基因植株中發(fā)現(xiàn)含有毛竹MLE轉(zhuǎn)座子Phmar1和Phmar2的轉(zhuǎn)基因植株出現(xiàn)了轉(zhuǎn)座現(xiàn)象,而含有非自主轉(zhuǎn)座子Phmar1NA和Phmar2NA的轉(zhuǎn)基因植株則沒(méi)有。結(jié)果表明了毛竹MLE轉(zhuǎn)座子Phmar1和Phmar2是具有轉(zhuǎn)活性

3、的,并且可以在模式植物擬南芥中發(fā)生異源轉(zhuǎn)座。
　　再對(duì)轉(zhuǎn)基因植株中Phmar1和Phmar2轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座足跡和插入位點(diǎn)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)兩種轉(zhuǎn)座子都會(huì)在轉(zhuǎn)座過(guò)程中留下轉(zhuǎn)座足跡,并且會(huì)轉(zhuǎn)座到擬南芥基因組的其他位置。再用生物信息學(xué)軟件對(duì)轉(zhuǎn)座足跡序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)Phmar1和Phmar2轉(zhuǎn)座子的剪切過(guò)程是不同,從而可以判斷這兩個(gè)轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座特性不同。
　　本研究是首次將竹亞科MLE轉(zhuǎn)座子在擬南芥中進(jìn)行異源轉(zhuǎn)座,并成功分析了轉(zhuǎn)座特性,