EMT過程中microRNAs與靶基因CDH1相互作用實驗研究.pdf

1、癌癥患者死亡的最主要原因是由于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并引起并發(fā)癥。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞由上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變成間質(zhì)細(xì)胞過程(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，CDH1基因編碼的E-鈣粘蛋白在EMT中起關(guān)鍵的作用，且在上皮細(xì)胞中高表達。E-鈣粘蛋白的下調(diào)或者缺失會降低細(xì)胞粘附的強度，導(dǎo)致細(xì)胞活動性的增加，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞穿過基底膜入侵周圍的組織。
　　對腫瘤細(xì)胞中microRNAs(miRNAs)與靶基因C

2、DH1相互作用研究，有助于人們了解相關(guān)疾病的發(fā)生過程，可以為臨床醫(yī)學(xué)提供一些治療方向和途徑。本文主要針對腫瘤HeLa細(xì)胞中EMT過程，開展了靶基因CDH1與miRNAs之間的相互作用機制研究，主要有以下三方面的工作和成果:
　　(1)利用預(yù)測軟件Targetscan，miRanda和PicTar，本文篩選出有可能調(diào)控靶基因CDH1的miRNAs。從中確定mir-23b，mir-92a，mir-340三個miRNAs作為具體的研究對

3、象，同時作為本實驗的對照，選取了有實驗文獻報道的mir-9作為參考。
　　(2)利用分子生物實驗的方法，首先，構(gòu)建出mir-9，mir-23b，mir-92a和CDH1質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞（人類的腫瘤細(xì)胞）和293T細(xì)胞（人類正常上皮細(xì)胞）。其次，通過雙熒光素酶檢測實驗，從RNA分子相互作用水平上，定量地測量了所選miRNAs對靶基因CDH1的作用;通過細(xì)胞劃痕實驗，從細(xì)胞水平上，研究了miRNAs對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。