太湖豬成纖維細(xì)胞系和前脂肪細(xì)胞系的建立及前脂肪細(xì)胞的分化研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以太湖豬為研究對(duì)象，采用組織塊法培養(yǎng)成纖維細(xì)胞系，膠原蛋白酶消化法培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞系，并對(duì)所建細(xì)胞系進(jìn)行了鑒定，包括細(xì)胞形態(tài)觀察、凍存前和復(fù)蘇后接種的存活率測(cè)定、生長(zhǎng)曲線繪制、染色體核型分析等一系列的生物學(xué)特性分析。此外，采用50nmol/L胰島素、100nmol/L地塞米松、100nmol/L羅格列酮和0.25mmol/L1-甲基-3-異丁基黃嘌呤分化誘導(dǎo)已建立的前脂肪細(xì)胞，觀察其形態(tài)學(xué)變化，用油紅O染色法進(jìn)行定性檢測(cè)，并通過(guò)測(cè)定

2、OD值確定誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞甘油三酯的變化情況。得到結(jié)果如下： 1.成纖維細(xì)胞呈梭形或不規(guī)則三角形，細(xì)胞先沿組織塊周圍生長(zhǎng)，隨后向外伸展形成生長(zhǎng)暈，傳代細(xì)胞與原代細(xì)胞在形態(tài)上無(wú)明顯差異。前脂肪細(xì)胞接種3～6h后開(kāi)始貼壁，為典型的成纖維細(xì)胞樣。 2.成纖維細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后接種的存活率分別為96.5％和93.2％，前脂肪細(xì)胞分別為95.4％和92.3％。 3.成纖維細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞的群體倍增時(shí)間均為72h，在體外的生長(zhǎng)

3、增殖趨勢(shì)呈“S”型，經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)增生期和停滯期三個(gè)階段，符合細(xì)胞在體外生長(zhǎng)的一般規(guī)律。 4.對(duì)成纖維細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞進(jìn)行染色體分析得出：2n=38，XY，為穩(wěn)定的二倍體細(xì)胞系，不存在種間的交叉污染。 5.誘導(dǎo)分化過(guò)程中，第3d即可觀察到小脂滴，第4d有多個(gè)小脂滴，隨著分化進(jìn)行大多數(shù)胞漿中的小脂滴聚集成葡萄串狀，細(xì)胞變成橢圓形或者圓形。大部分前脂肪細(xì)胞在第9～10d均成功的分化成為成熟的脂肪細(xì)胞，用油紅O染色呈紅色。