AP-1信號(hào)傳導(dǎo)通路細(xì)胞模型的建立.pdf

1、AP-1(activatorprotein-1)，是細(xì)胞接受外界刺激調(diào)節(jié)生物反應(yīng)的一個(gè)重要的生物感受器。它是由Fos，Jun，ATF和MAF蛋白家族組成的同源或異源二聚體，屬于亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族成員1,2，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中以Fos和Jun為主，其中c-Fos和c-Jun組成的異源二聚體是其最穩(wěn)定的形式。AP-1信號(hào)傳導(dǎo)通路可以被生長(zhǎng)因子，炎性細(xì)胞因子，UV和離子輻射，細(xì)胞應(yīng)激，細(xì)菌和病毒感染，腫瘤轉(zhuǎn)化劑等多種刺激激活。激活后的AP-

2、1與TPA反應(yīng)元件(TRE：5'TGAC/GTCA-3')結(jié)合，調(diào)節(jié)下游基因表達(dá)。 AP-1作為對(duì)外界信號(hào)發(fā)生反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子而且位于信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的末端，使外界信號(hào)和細(xì)胞功能之間建立起一定的聯(lián)系。有研究發(fā)現(xiàn)AP-1蛋白的激活與細(xì)胞的增生，分化，轉(zhuǎn)化，凋亡，感染，生存和死亡，以及免疫反應(yīng)相關(guān)7。那么尋找AP-1蛋白的激活物，無(wú)疑對(duì)于人類(lèi)對(duì)抗腫瘤，感染，凋亡等疾病以及對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的認(rèn)識(shí)具有重要的意義。 本項(xiàng)研究即以構(gòu)建AP-1信

3、號(hào)傳導(dǎo)通路高通量篩選細(xì)胞模型為目的，用于高通量篩選可以激活此信號(hào)傳導(dǎo)通路的未知因子，以及高通量的分析某些藥物在體內(nèi)作用的特異性和效率，用以發(fā)現(xiàn)新藥以及闡明某些藥物的作用機(jī)制，為AP-1的研究提供一個(gè)簡(jiǎn)單有效的方法和工具。在本研究中，將AP-1的順式作用元件TRE序列人工合成，與綠色熒光蛋白的基因連接，插入含有抗嘌呤霉素基因的載體。將載體整合入293E細(xì)胞的基因組中，利用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，再利用敏感藥物TPA，篩選出背景低而