1，25-二羥維生素D-,3-對哮喘大鼠氣道炎癥和肺內及巨噬細胞中誘導型一氧化氮合酶的影響.pdf

1、支氣管哮喘(下稱哮喘)是一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病，全球發(fā)病率逐年增高，慢性氣道炎癥哮喘主要特征，表現為間歇的氣道阻力增加，氣道炎癥和粘液高分泌。而呼出氣中體中一氧化氮的高含量也被認為是哮喘的一個特征，NO的增加與氣道的炎性反應、誘導痰中的嗜酸細胞及氣道阻力是成正相關。深入探討氣道炎癥的機制對于發(fā)現新的、有效的哮喘治療方法具有重要意義。近幾年的研究發(fā)現，1,25-二羥維生素D3(1，25(OH)2D3)參與多種疾病的炎癥過程，具有廣泛的抗炎

2、作用。但對1，25(OH)2D3在哮喘氣道炎癥中的作用尚缺乏統(tǒng)一的認識。本課題從體內、體外兩方面，研究1，25(OH)2D3參與哮喘氣道炎癥作用和機制。 第一部分：1,2s-二羥維生素D3對哮喘大鼠氣道炎癥和肺內誘導型一氧化氮合酶影響 第一節(jié)：哮喘大鼠模型的建立和1，25-二羥維生素D3對氣道炎癥的影響 目的：本節(jié)探討1,25-二羥維生素D3對于大鼠哮喘氣道炎癥和肺功能的影響。 方法：50只Wistar大

3、鼠隨機分為四組：正常對照組，哮喘組，預防處理組和治療組。用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，第一組預防處理組在致敏前三天給予口服羅蓋全(2.5μg/kgperday)，共給藥3周，第二組預防組則于致敏第一、七天給予肌注vitaminD3(500000U/kg)。治療組則于激發(fā)開始前給藥處理。應用動物肺功能儀測定大鼠對于乙酰膽堿刺激的氣道反應性，測定支氣管肺泡灌洗液細胞總數、嗜酸性粒細胞計數和IL-4表達水平及肺組織病理變化。檢測肺組織

4、中一氧化氮(NO)含量。 結果：1,25(OH)2D3預防及治療組可減輕BALF中細胞總數及嗜酸性粒細胞計數，同時降低肺組織中NO量，改善哮喘肺功能。 結論：以上結果提示哮喘大鼠給予1,25(OH)2D3可降低哮喘氣道炎癥。 第二節(jié)：1,25-二羥維生素D3對大鼠哮喘模型iNOs的影響 目的：探討1,25-二羥維生素D3對大鼠哮喘模型iNOs的影響。 方法：50只Wistar大鼠隨機分為四組，處理

5、及給藥同第一節(jié)。檢測肺組織中一氧化氮合酶活性(iNOS)和各組iNOSmRNA表達水平，用免疫組化染色方法檢測肺組織iNOS的表達并觀察iNOS在氣道組織分布的改變，檢測各組間iNOS蛋白的表達水平。 結果：1，25(OH)2D3預防及治療組可降低肺組織iNOS活性，1,25(OH)2D3預防及治療組可降低哮喘大鼠肺組織中iNOSmRNA的表達水平，同時免疫組化結果顯示，干預組可降低哮喘大鼠氣道組織中上皮細胞和巨嗜細胞中iNOS

6、陽性。蛋白檢測提示干預組可降低哮喘大鼠氣道組織中iNOS蛋白的表達。 結論：哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3可降低iNOS表達水平，提示1,25(OH)2D3對于哮喘可能有潛在的治療作用。 第二部分：1,25-二羥維生素D3對于體外哮喘大鼠巨噬細胞的影響和作用機制 第一節(jié)：1,25-二羥維生素D3在體外對于大鼠巨噬細胞的影響 目的：探討1,25.二羥維生素D3在體外對于大鼠巨噬細胞的影響。 方法

7、：用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，分離大鼠肺泡灌洗液中巨噬細胞，體外培養(yǎng)，給予10-13～10-8mol/L1,25(OH)2D3干預，ELISA檢測培養(yǎng)上清液中IL-4水平，同時檢測上清中NO含量和iNOS活力，免疫組化檢測巨噬細胞iNOS表達情況。 結果：1，25(OH)2D3干預組可降低IL-4水平，降低培養(yǎng)上清iNOS活性和NO含量，同時免疫組化結果顯示，干預組可降低哮喘大鼠巨嗜細胞中iNOS陽性表達。 結

8、論：1,25(OH)2D3體外干預培養(yǎng)巨噬細胞可降低NO及IL-4水平。 第二節(jié)：1,25-二羥維生素D3對于體外哮喘大鼠巨噬細胞的影響和作用機制 目的：探討1,25.二羥維生素D3對于體外哮喘大鼠巨噬細胞iNOS的影響和作用機制。 方法：用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，分離大鼠肺泡灌洗液中巨噬細胞，體外培養(yǎng)，給予10-13～10-8mol/L1，25(OH)2D3干預，并觀測不同時段不同濃度1，25(OH

9、)2D3對巨噬細胞的影響，RT-PCR和Westernblot方法檢測不同干預組iNOS的表達。 結果：不同時段和不同干預濃度的1，25(OH)2D3均可以降低巨噬細胞iNOS的表達。 結論：1，25(OH)2D3通過降低體外哮喘大鼠巨噬細胞iNOS的表達來調節(jié)哮喘。 課題主要結論： 1.哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3干預可降低哮喘氣道炎癥和改善肺功能。 2.哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3