IL-1ra突變體的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素1受體拮抗劑(IL-1ra)為IL-1家族中的一員，其本身無任何激動(dòng)劑的作用，但能特異性地與IL-1受體結(jié)合，從而拮抗IL-1的各種生物學(xué)效應(yīng)。2001年，由Amgen公司生產(chǎn)的重組人白細(xì)胞介素1受體拮抗劑(rhIL-1ra，專利名稱為Kineret)被美國食品與藥物管理局(FDA)和歐洲EMEA批準(zhǔn)上市，用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，但是由于微量的IL-1就可以引起完全的生物學(xué)效應(yīng)，在疾病治療過程中只有IL-1ra與IL-1的比

2、值達(dá)到10000-100000時(shí)才能有效地緩解癥狀，因此rhIL-1ra的用量高達(dá)100-150mg/d，頻繁用藥加重了病人的身體、心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。 本研究旨在利用定點(diǎn)突變，延長IL-1ra的半衰期，提高其代謝穩(wěn)定性。 本課題首先利用重疊延伸PCR對IL-1ra的基因進(jìn)行以下幾個(gè)位點(diǎn)的突變：R6K7-AA，R93K94-AA，K97R98-AA。將IL-1ra及三個(gè)突變體的序列插入表達(dá)載體pTIG-Trx，利用大腸桿菌B

3、L21(DE3)對其進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物先后經(jīng)鎳柱親和純化，SephadexG75凝膠過濾獲得純度在90％以上的目的蛋白。利用EL-4，CTLL-2細(xì)胞對目的蛋白進(jìn)行體外活性檢測，結(jié)果表明，與IL-1ra相比，三個(gè)突變體的生物學(xué)活性并未降低。利用大耳白兔對野生型IL-1ra及三個(gè)突變體進(jìn)行了初步的藥代動(dòng)力學(xué)分析，其中3號突變體的半衰期與野生型IL-1ra相比提高了2.26倍。 本課題為提高IL-1ra的代謝穩(wěn)定性的研究奠定了初步的