微生物酶法拆分DL-泛解酸內(nèi)酯.pdf

1、泛酸，即維生素B5，廣泛存在于生物界中，是動物體內(nèi)合成輔酶A的主要原料，其主要作用是參與糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、飼料和食品等領(lǐng)域。D-泛解酸內(nèi)酯是D-泛酸合成過程中重要的手型中間體，生產(chǎn)D-泛酸的關(guān)鍵技術(shù)是DL-泛解酸內(nèi)酯的手性拆分技術(shù)。對比采用昂貴手性拆分劑的化學(xué)拆分方法，微生物酶法拆分具有原料成本低，條件溫和，易于操作，環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。 通過比較各種生物法的拆分路線，本課題采用選擇性水解D型內(nèi)酯的路線，即用D

2、-立體專一內(nèi)酯水解酶水解消旋內(nèi)酯中的D-泛解酸內(nèi)酯，得到D-泛解酸，再通過內(nèi)酯化得到D-泛解酸內(nèi)酯，而L-泛解酸內(nèi)酯經(jīng)過消旋化可以反復(fù)使用。該路線不要求水解徹底，反應(yīng)時(shí)間短，得到的產(chǎn)品D-泛解酸內(nèi)酯光學(xué)純度高，反應(yīng)容易控制，而且底物的濃度可以達(dá)到很高的水平。 本文通過篩選得到一株具有較高D-泛解酸內(nèi)酯水解酶活性的菌株Fusariumavenaceum3.4594，并以生物量和酶活為指標(biāo)考察該菌的產(chǎn)酶發(fā)酵條件，確定其培養(yǎng)最佳條件是

3、溫度28℃，培養(yǎng)基初始pH5.0，培養(yǎng)72h。海藻酸鈣包埋的方法固定化菌體，明顯提高菌體酶的穩(wěn)定性和重復(fù)利用率，且易于保藏。同時(shí)以相對酶活和固定化收率為指標(biāo)評價(jià)了固定化條件，確定了最佳固定化條件，固定化細(xì)胞粒徑2.5mm，CaCl2溶液的濃度30g·L-1，固定化時(shí)間為1h，海藻酸鈉的濃度為24g·L-1，包埋率為200g·L-1。以固定化的細(xì)胞為催化劑，考察了催化的條件，其最佳催化條件為溫度30℃，pH7.0左右，固定化細(xì)胞的加入量在