24241.d泛解酸內(nèi)酯水解酶的固定化研究

1、分類號(hào)：TQ93密級(jí)：(秘密機(jī)密絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：08812535D一泛解酸內(nèi)酯水解酶的固定化研究StudyonImmobilizationolDlactonohydrolase專業(yè)名稱：微牛物與生化藥學(xué)(理)指導(dǎo)教師姓名：黎明副教授研究生姓名：張建中申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：理學(xué)碩士論文提交H期：2011年3月論文課題米源：省部級(jí)專項(xiàng)課題學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要D泛解酸內(nèi)酯水解酶可以專一牲拆分DL泛解酸如酯，生成D一泛解

2、酸。D一泛解酸是合成合成維生素類藥物D泛醇及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥D一泛酸鈣的前體。本文以本實(shí)驗(yàn)室篩選的高產(chǎn)D泛解酸內(nèi)酯水解酶的菌株腐皮鐮孢菌(FusariumproliferatumvaFproliferatumAS34738)為材料發(fā)酵產(chǎn)菌絲體，研究了從菌絲體提取D一泛解酸內(nèi)酯水解酶以及固定化該酶的方法，明確了固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)并對(duì)固定化酶的轉(zhuǎn)化工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，從而為該酶的工業(yè)化應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)用液氮研磨法、高壓均質(zhì)法和超聲破碎法對(duì)菌絲

3、體進(jìn)行破壁處理，結(jié)果顯示三種方法處理所得的酶活提取率分別為：5758％，5697％和5378％。然后進(jìn)行超濾濃縮，粗酶液由0013U／mL提高到O04UtmL，酶活損失率為35％。實(shí)驗(yàn)選用了6種有代表性的樹脂D3520、D一152、D一380、N—KA9、AB一8和ESV1進(jìn)行研究。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)D一380吸附D一泛解酸內(nèi)酌水解酶的效果最好。用它固定化酶，酶活可達(dá)4U／g樹脂，酶活回收率達(dá)到667％。通過比較戊二醛和THP的交聯(lián)效果，發(fā)現(xiàn)

4、戊二醛的交聯(lián)效果優(yōu)于THP。使用日訂者的圊定化酶活是后者的476倍。優(yōu)化的戊二醛固定化條件為：加酶量為6U／g樹脂，吸附DH75，吸附溫度30。C，吸附時(shí)I訓(xùn)4h；戊二醛(終)濃度01％，交聯(lián)時(shí)問lh，變聯(lián)溫度4℃。采用單因素的實(shí)驗(yàn)方法確定了固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)：固定化D泛解酸內(nèi)酯水解酶最適溫度40。C，比游離酶提高了10。C；其熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均有定的提高；固定化酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)K。為28。2mmol／L，比報(bào)道的D一泛解酸內(nèi)酯水解酶的