鱉甲防治肝纖維化及其作用機制的實驗研究.pdf

1、肝硬化是嚴重危害人類身心健康的常見病、多發(fā)病。肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑，是各種慢性肝病的共同病理學基礎(chǔ)，是由各種損肝因素(炎癥、中毒、慢性淤膽、代謝障礙、血液循環(huán)障礙、營養(yǎng)障礙等)誘發(fā)的肝細胞變性壞死-炎癥反應-纖維結(jié)締組織增生這一反復發(fā)作的病理修復反應。其病理學特征為匯管區(qū)纖維結(jié)締組織增多，形成細小的條索和菲薄的間隔，并向肝小葉內(nèi)延伸，但尚未形成假小葉和再生結(jié)節(jié)。肝纖維化具有可逆性。 若病因持續(xù)存在，肝纖維化逐

2、漸加重，引起肝小葉及血管等改建，假小葉和結(jié)節(jié)形成，即發(fā)展為肝硬化，病變將難逆轉(zhuǎn)，且對肝臟造成諸多不良影響，如纖維隔中所存在的血管直接將肝動脈及門靜脈的血流分流出肝臟，減少與肝實質(zhì)接觸；膠原纖維沉著導致肝竇毛細血管化，阻礙血流與肝細胞接觸；肝動脈與門靜脈交通支開放，以及小葉中心纖維化阻礙血流進入肝靜脈，而加劇門脈高壓。臨床見有營養(yǎng)障礙、門脈高壓、脾亢、腹水等。 因此，采取適當措施，將病變終止于肝纖維化階段甚至逆轉(zhuǎn)至正常，是治療慢性

3、肝病和預防肝硬化、肝癌的關(guān)鍵。 鱉甲作為防治肝纖維化的常用中藥，備受人們關(guān)注。關(guān)于鱉甲防治肝纖維化的劑型，歷來存在兩種觀點，研末吞服、入丸散抑或入湯劑久煎，莫衷一是。本研究通過鱉甲提取物對肝星狀細胞影響的實驗，以及鱉甲不同劑型體外和在體實驗，闡明其抗肝纖維化的作用及可能機制。 1.體外實驗鱉甲對肝星狀細胞的影響 1.1 鱉甲提取物及鱉甲不同劑型對肝星狀細胞增殖的影響 目的:探討鱉甲不同劑型對肝星狀細胞 (

4、HSC)增殖的影響作用，以及鱉甲對HSC增殖影響的物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法:傳代培養(yǎng)的大鼠肝星狀細胞系HSC-T6與鱉甲不同劑型(散劑、湯劑)含藥血清以及鱉甲提取物(蛋白質(zhì)類物質(zhì)、分子量大于和小于6000的物質(zhì))共同培養(yǎng)48h、72h后，采用MTT比色法測定各濃度組HSC增殖情況。 結(jié)論:分析鱉甲成分，鑒于甲殼素、殼聚糖是由β一葡萄糖借β-1，4糖苷鍵組成的高分子多糖類纖維素，不溶于水，人體消化液不含水解β-1，4糖苷鍵的纖維素

5、酶，所以不被消化利用。推測鱉甲經(jīng)煎煮后，起負抑制效應的大分子蛋白變性成為小分子肽類物質(zhì)而發(fā)揮抑制HSC增殖的作用。 1.2 鱉甲提取物對肝星狀細胞活化及膠原合成的影響 目的:探討鱉甲提取物是否抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)刺激的人肝星狀細胞系(LX-1 細胞)Ⅰ型膠原(collagen TypeⅠ，colⅠ，C-Ⅰ)、Ⅲ型膠原(collagen Type Ⅲ，col Ⅲ，C-Ⅲ)等蛋白表達，以及能否經(jīng)

6、過調(diào)控α-肌動球蛋白(α-SMA)等細胞因子表達而抑制HSC的激活，從而抑制肝纖維化的進展。 方法:膜透析法提取鱉甲分子量<6000的物質(zhì)，Western-blot法檢測各組LX-1細胞colⅠ，Col Ⅲ、α-SMA蛋白表達。以Actin作為內(nèi)參照。作空白對照、TGF-β<,1>刺激對照和干擾素-γ(IFN-γ)對照。 結(jié)論:鱉甲分子量<6000 物質(zhì)作用組能顯著抑制 TGF-β<,1>刺激的LX-1 細胞Col-Ⅰ、

7、Col-Ⅲ等蛋白表達、顯著抑制α-SMA表達而抑制HSC的激活及肝纖維化發(fā)生發(fā)展。 2．在體實驗：鱉甲防治肝纖維化大鼠作用及機制研究 目的:探討鱉甲不同劑型防治大鼠肝纖維化及其作用機制。 方法: 36只雌性SD大鼠隨機分為6組：正常組、肝纖維化模型組、鱉甲煎煮液防治組和治療組、鱉甲微粉防治組和治療組。除正常組外，其余五組以40％CCl<,4>0.12ml/100g體重背部皮下注射，隔日一次，共12周。造模6周，中

8、等度纖維化形成。藥物防治組于造模同期分別給以鱉甲微粉煎煮液、鱉甲微粉藥液0.27g生藥/100g體重灌胃，1/日；藥物治療組于造模第7周開始給以上述藥液灌胃。實驗12周末，采集大鼠血清及肝組織標本送檢。實驗數(shù)據(jù)以 x±s表示，應用單因素方差分析，計數(shù)資料采用 Ridit 檢驗法，P<0.05為差異具有顯著性意義。 結(jié)論：鱉甲煎煮液能有效地預防和治療大鼠肝纖維化，效果顯著，其作用機制可能是通過抗脂質(zhì)過氧化、改善肝組織病理、改善肝功