氣道Orai1通道干預(yù)對小鼠實驗性變應(yīng)性鼻炎的影響.pdf

1、復(fù)旦大學博士學位論文氣道ai1通道干預(yù)對小鼠實驗性變應(yīng)性鼻炎的影響姓名：汪毅申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導(dǎo)教師：鄭春泉20120405復(fù)旦大學博士論文結(jié)果：PANC1細胞經(jīng)LentiORAllshRNA感染后可表達慢病毒所攜帶的GFP基因而發(fā)出綠色熒光，當感染復(fù)數(shù)為10時，LentiORAllshRNA感染PANC1細胞48小時后感染效率為9828％，對細胞ORAll基因的轉(zhuǎn)錄抑制效率為905％；而用于對照的空載慢病毒在相同條

2、件下感染效率為9875％，對ORAll基因的轉(zhuǎn)錄抑制效率為3％。小鼠鼻腔感染LentiORAllshRNA后，鼻黏膜ORAllmRNA水平隨感染時間逐漸降低，至第3天時達最低，隨后逐漸升高，感染后一月左右OrailmRNA水平仍低于正常對照組水平。ARLI組小鼠鼻黏膜與脾臟ORAllmRNA水平均較AR組下降，其鼻黏膜Orail蛋白表達水平也低于AR組小鼠，末次鼻腔激發(fā)后撓鼻數(shù)與噴嚏數(shù)較AR組小鼠也都明顯減少；ARGFP組小鼠鼻黏膜與脾

3、臟ORAllmRNA水平，Orail表達水平及末次激發(fā)后噴嚏數(shù)與撓鼻數(shù)與AR組小鼠相比均無明顯差異。免疫組化結(jié)果提示ARLI組小鼠鼻黏膜上皮層與固有層、鼻黏膜相關(guān)淋巴組織、脾臟生發(fā)中心等部位Orail表達均較AR組小鼠減少。ARLI組小鼠鼻黏膜與脾臟中LTC4S、EAR3、germlineC￡與IL4的mRNA水平均明顯低于AR組小鼠，其鼻腔灌洗液中LTC4、OVAIgE與IL4的濃度以及血清中LTC4、ECP、OVAIgE與IL一4的

4、濃度也均低于AR組小鼠，ARGFP組小鼠鼻黏膜與脾臟中LTC4S、EAR3、germlineC￡與IL一4的mRNA水平與AR組小鼠無明顯差異，其鼻腔灌洗液與血清中LTC4、ECP、OVAIgE與IL4的濃度與AR組小鼠也無明顯差異。AR組小鼠鼻黏膜中IL33、IL17E與TSLP的表達水平均明顯高于正常對照組小鼠，ARLI組小鼠鼻黏膜中IL一33與TSLP的表達水平較AR組有所下降，但IL17E的表達水平與AR組相比無明顯差異。ARG

5、FP組小鼠鼻黏膜中IL33、IL17E與TSLP的表達水平與AR組小鼠相比均無明顯差異。結(jié)論：成功構(gòu)建針對ORAll基因進行RNA干擾的重組慢病毒Lenti—ORAll一shRNA；LentiORAllshRNA能夠成功感染PANC一1細胞并有效抑制ORAll基因的轉(zhuǎn)錄水平。LentiORAllshRNA鼻腔滴入可成功感染小鼠鼻黏膜細胞，感染后第3天對ORAll基因的轉(zhuǎn)錄抑制效率達到最高。變應(yīng)性鼻炎小鼠LentiORAllSllI礬A鼻

6、腔干預(yù)后可有效下調(diào)其鼻黏膜與脾臟中Orail表達水平，并減輕其鼻炎癥狀。下調(diào)鼻黏膜中Orail表達不僅可降低變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻黏膜中肥大細胞、嗜酸性粒細胞、B細胞與Th2細胞中相關(guān)炎性介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與釋放，也可降低全身如脾臟與血清中上述免疫細胞炎性介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與釋放。LentiORAllshRNA鼻腔干預(yù)對小鼠變應(yīng)性鼻炎炎癥的抑制作用可能與其阻礙了鼻黏膜上皮細胞中IL一33與TSLP蛋白的合成和表達有關(guān)關(guān)鍵詞：Orail；小鼠：變應(yīng)性鼻炎：慢病