惡性膠質(zhì)瘤中EGFR和VEGFR2分子靶向聯(lián)合治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用傳代的人腦多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastomamultiforme，GBM)新鮮手術(shù)標(biāo)本來(lái)建立呈侵襲性生長(zhǎng)及表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)高表達(dá)的人腦GBM裸小鼠腦原位移植模型，然后在此已建立的能保持親本腫瘤生物學(xué)特性的人腦惡性膠質(zhì)瘤原位移植模型基礎(chǔ)上，把EGFR抑制劑與常規(guī)化療藥物或與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2(vascularendothelialgrowth

2、factorreceptor-2，VEGFR2)抑制劑聯(lián)合應(yīng)用來(lái)治療人腦GBM移植瘤，以探討不同作用機(jī)理的化學(xué)治療藥物聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)GBM的療效。
　　 方法：將傳代的新鮮人腦GBM手術(shù)標(biāo)本行裸小鼠右尾狀核接種后第3d用于分組實(shí)驗(yàn)。(1)40只鼠隨機(jī)分為4組，10只/組，各組鼠分別應(yīng)用靶向EGFR的蛋白酪氨酸激酶抑制劑AG1478（25mg/kg.次）、CDDP(3mg/kg.次)、AG1478+CDDP（25mg/kg.次+3m

3、g/kg.次）及磷酸鹽緩沖液（PBS，0.lml/只，次）。PBS和藥物均腹腔注射，每2d一次，共4次，用藥后分別觀察各組荷瘤鼠生存期。再取40只鼠，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，腫瘤移植后14d處死所有組鼠取腦，HE染色后觀察各組移植瘤形態(tài)及體積變化；EnVision和WesternBlot法檢測(cè)移植瘤中EGFR、磷酸化EGFR(P-EGFR)、增殖活性(Ki-67labellingindex，即Ki-67LI)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vasculare

4、ndothelialgrowthfactor，VEGF)、白細(xì)胞介素一8（IL-8）和微血管密度(microvesseldensity，MVD)變化；TUNEL法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞凋亡(apoptoticindex即AI)變化。(2)40只荷瘤鼠隨機(jī)分為4組，10只/組，分別應(yīng)用靶向EGFR的單克隆抗體C225(50mg/kg.次)、靶向VEGFR-2的單克隆抗體DCI01（40mg/kg.次）、C225+DC101(50mg/kg.次+4

5、0mg/kg．次)及PBS(0.1ml/只，次)。PBS組和藥物均腹腔注射，每2d一次，共4次。腫瘤移植后14d，處死所有組鼠取腦，HE染色觀察各組移植瘤形態(tài)及體積變化；EnVision法檢測(cè)移植瘤中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase，MMPl)、MVD及增值活性變化；TUNEL法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡變化。
　　 結(jié)果：(1)與對(duì)照組生存期為19.4±0.6d比較，單用CDDP或AG1478后荷瘤鼠生

6、存期分別為20.7±0.4d和20.8±0.6d(P>O.05)，而CDDP+AG1478組荷瘤鼠生存期為33.6±0.gd(P

7、，DC101+C225組移植瘤體積下降了62.9％(PO.05)；DCI01組移植瘤侵襲性加強(qiáng)，移植瘤中MMP1表達(dá)為(++)；C225組移植瘤侵襲性下降，移植瘤中MMP1表達(dá)陽(yáng)性(+)；C225+DC101組移植瘤侵襲性也下降，移植瘤中MMPl表達(dá)陽(yáng)性(+)；DCI01組移植瘤中MVD減少了64％(P<0.05)，C225+DC101組MVD減少了68％(P<0.05)，C225組

8、的MVD無(wú)明顯變化(P>O.05)；DC101組腫瘤細(xì)胞Ki-67LI下降了53.2％(P<0.05)，DC101+C225聯(lián)合用藥后Ki-67LI下降了56.4％(P0.05)；DC1O1誘導(dǎo)細(xì)胞AI增加了66.7％(P0.05)。
　　 結(jié)論：(1)AG1478與CDDP聯(lián)合