貴州省安順地區(qū)蛇源裂頭蚴組織結(jié)構(gòu)觀察及分離株的分子鑒定.pdf

1、目的: 觀察貴州省安順地區(qū)蛇源裂頭蚴蟲株的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)分離株進(jìn)行分子鑒定及種系發(fā)育關(guān)系的分析。
　　方法: 采集安順地區(qū)不同蛇源裂頭蚴，分別作10％福爾馬林及70%乙醇固定。HE染色裂頭蚴，進(jìn)行組織觀察和圖像采集，并與蛙株裂頭蚴的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行對(duì)比。提取全蟲 DNA，PCR擴(kuò)增 ITS1和cox1基因，所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序鑒定后，從GenBank獲取相應(yīng)的基因序列，采用BLAST、Clustalx1.81生物分析軟件進(jìn)行多重

2、比對(duì)序列分析，并應(yīng)用軟件MEGA6.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（鄰位連接法）。
　　結(jié)果: ①裂頭蚴蟲體前、后端略膨大，不分節(jié)，體表有許多環(huán)形皺褶。由于頸部較短而粗，使得前端經(jīng)頸部到體段的轉(zhuǎn)變區(qū)域不明顯。頂端中央有一孔向內(nèi)凹陷成隧道狀，向后延長(zhǎng)一定距離后形成盲端。蟲體結(jié)構(gòu)無(wú)體腔，體壁由皮層和皮下層組成。微毛位于皮層的外表面，遍布整個(gè)蟲體。實(shí)質(zhì)區(qū)有肌纖維層、皮層細(xì)胞、實(shí)質(zhì)細(xì)胞、排泄系統(tǒng)和石灰小體等。②成功擴(kuò)增出8株裂頭蚴的ITS1和cox1基

3、因序列，ITS1大小為822～863bp，cox1大小為404～415bp，與預(yù)期的基因片段大小一致?；贗TS1和cox1基因序列構(gòu)建的種系發(fā)育樹(shù)與所有的猬迭宮絳蟲均構(gòu)成同一亞群，總分支的自展值為高于50%，二者在不同的分離株之間呈現(xiàn)基因多態(tài)性。對(duì)8株裂頭蚴ITS1和cox1序列的同源性進(jìn)行比較，ITS1的同源性為70.27%～82.84%，而cox1的同源性為95.63%～99.50%，顯示cox1的同源性高于ITS1。已向GenB

4、ank提交ITS1和cox1新序列各一個(gè)，獲得登錄號(hào)為KF990161和 KJ418421。
　　結(jié)論: ①組織結(jié)構(gòu)觀察和基因序列比對(duì)鑒定所取得蛇源裂頭蚴為猬迭宮絳蟲；②在HE染色的組織結(jié)構(gòu)觀察水平上，區(qū)分不同裂頭蚴分離株是困難的，但卻有助于裂頭蚴病的診斷及防治等的后續(xù)性研究；③研究結(jié)果表明，不同蛇源裂頭蚴分離株之間存在基因多態(tài)性，從總分支的自展值來(lái)看，cox1比ITS1更適合用于種內(nèi)遺傳多態(tài)性研究，ITS1適合做定種的分子標(biāo)記。