藍莓提取物改善AD小鼠認知功能的海馬蛋白質組學研究.pdf

1、目的：
　　觀察藍莓提取物干預對阿爾茨海默病模型小鼠(APP/PS1轉基因小鼠)認知功能的改善作用，并通過蛋白質組學技術研究藍莓提取物干預對APP/PS1轉基因小鼠海馬組織蛋白質表達譜的影響，以探討藍莓提取物改善阿爾茨海默病的分子機制。
　　方法：
　　實驗分為三部分，第一部分通過基因型鑒定確定動物飼養(yǎng)中心繁育幼鼠的基因型，從行為學（Morris水迷宮）及病理學兩方面進行AD動物模型評價;第二部分將APP/PS1轉基因

2、小鼠及同窩別正常小鼠分為3組:AD模型組（模型組）、藍莓干預組（干預組）及野生型對照組（對照組）。以灌胃方式進行干預，干預組小鼠干預劑量為150mg/kg·bw·d，模型組及對照組小鼠灌胃超純水，干預時間3個月。通過Morris水迷宮實驗檢測小鼠的空間學習記憶能力;病理學觀察小鼠海馬區(qū)域組織形態(tài)學改變;第三部分利用蛋白質組學技術制備模型組小鼠及干預組小鼠海馬組織的二維凝膠(2-DE)圖譜，使用Image Master2DPlatinum

3、5.0軟件進行差異蛋白點分析，通過基質輔助激光解析（串聯(lián)）飛行時間質譜儀(MALDI-TOF/TOF-MS)鑒定差異蛋白質的種類，并通過Western blot確證關鍵蛋白質的表達水平。
　　結果：
　　1.通過基因型鑒定成功確定繁育小鼠的基因型，APP/PS1種鼠后代的陽性率在40％～65％之間。Morris水迷宮結果顯示模型組小鼠逃避潛伏期明顯長于對照組小鼠(P＜0.05)，單位時間內穿越平臺區(qū)域的次數(shù)顯著少于對照組(P

4、＜0.05);病理學觀察發(fā)現(xiàn)APP/PS1轉基因小鼠海馬組織結構及細胞形態(tài)出現(xiàn)明顯異常，CA1區(qū)及CA3區(qū)神經(jīng)元失去正常結構，細胞排列疏松紊亂、層數(shù)減少;錐體細胞大量喪失、數(shù)目減少，細胞聯(lián)結松懈，細胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶，胞體縮小，細胞核出現(xiàn)固縮、凋亡，海馬區(qū)域可見剛果紅染色陽性表達。
　　2.干預期間，各組小鼠攝食量有所波動但總體變化趨勢一致，各組小鼠體重的變化幅度不大，模型組小鼠平均體重大于干預組和照組小鼠;Morris水迷宮實驗顯

5、示，與模型組小鼠比較，對照組及干預組小鼠逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05），單位時間內穿越平臺區(qū)域的次數(shù)顯著增加(P＜0.05);病理學觀察發(fā)現(xiàn)，與模型組小鼠比較，干預組小鼠海馬雖仍有神經(jīng)元凋亡但海馬結構及細胞形態(tài)異?，F(xiàn)象有所改善，海馬區(qū)域未見明顯剛果紅染色陽性表達。
　　3.成功建立小鼠海馬蛋白質2-DE方法(系統(tǒng)重復性為83.0％，操作重復性為79.5％)，圖像分析共有12個蛋白點在模型組小鼠和干預組小鼠海馬組織表達有顯著性差

6、異，經(jīng)基質輔助激光解析（串聯(lián)）飛行時間質譜(MALDI-TOF/TOF-MS)鑒定得到9種蛋白質。其中，藍莓提取物干預后小鼠海馬組織表達下調的蛋白質包括:α-烯醇酶(alpha-enolase)、蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase)、蘋果酸脫氫酶1(malate dehydrogenase1)、磷酸化應激蛋白1（stress-induced-phosphoprotein1）和T復合體蛋白1亞基β(T-complex

7、protein1subunit beta);表達上調的蛋白質包括:細胞色素b-c1復合體亞基6(Cytochrome b-e1complex subunit6)、β-肌動蛋白(beta-actin)，動力蛋白1（Dynamin1）、熱休克同源蛋白71(heat shock cognate71)。Dynamin1與囊泡突觸循環(huán)密切相關，Western blot方法對小鼠海馬組織Dynamin1蛋白的表達量進行確認，結果與蛋白質組學研究結果