左歸丸加減方對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和骨向分化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 觀察左歸丸加減方對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mcscnchymal Stem Cells，MSCs)增殖和向成骨細(xì)胞分化的影響。 方法： 1.運(yùn)用全骨髓法(貼壁篩選法)分離和培養(yǎng)大鼠MSCs并進(jìn)行鑒定； 2.制備高中低濃度的左歸丸加減方含藥血清，用MTT法檢測(cè)左歸丸加減方含藥血清對(duì)MSCs增殖的影響，了解量效關(guān)系； 3.用不同濃度的左歸丸加減方含藥血清誘導(dǎo)MSCs向成骨細(xì)胞(oste

2、oblast，OB)分化，分高濃度左歸丸加減方組、中濃度左歸丸加減方組、低濃度左歸丸加減方組、經(jīng)典誘導(dǎo)組和空白對(duì)照組共五組； 4.用Von-Kossa染色對(duì)加入不同濃度左歸丸加減方含藥血清誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行染色，確定左歸丸加減方含藥血清對(duì)MSCs是否具有成骨誘導(dǎo)作用； 5.運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Ⅰ型膠原的表達(dá)，并進(jìn)行灰度分析，確定左歸丸加減方含藥血清對(duì)MSCs是否具有骨向誘導(dǎo)分化作用。 結(jié)果： 1.MSC

3、s分離后基本貼壁，12～15d達(dá)到融合； 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，第三代MSCs中G0/G1期的細(xì)胞為96.7％，G2期的細(xì)胞為1.2％，S期的細(xì)胞為2.1％；低表達(dá)CD29，高表達(dá)CD44和CD105，不表達(dá)CD34，CD45，CD19，符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特征； 3.與空白對(duì)照組相比，不同濃度的左歸丸加減方含藥血清均能促進(jìn)MSCs增殖，并且其作用呈量效依賴關(guān)系(P<0.05)； 4.加入不同濃度左歸丸加減

4、方含藥血清誘導(dǎo)21d后，經(jīng)Von-Kossa染色均能觀察到黑色的礦化結(jié)節(jié)； 5.與空白對(duì)照組相比，除低濃度左歸丸加減方含藥血清誘導(dǎo)第7d對(duì)Ⅰ型膠原平均灰度的表達(dá)沒有明顯影響外(P>0.05)，不同濃度左歸丸加減方含藥血清對(duì)Ⅰ型膠原平均灰度的表達(dá)均有上調(diào)作用(P<0.05)。 結(jié)論： 高中低濃度左歸丸加減方含藥血清均具有促進(jìn)MSCs增殖的作用，并呈量效依賴關(guān)系。各濃度左歸丸加減方含藥血清均能顯著誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞(O