3種根管沖洗劑和充填劑對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性的體外研究.pdf

1、研究背景： 根管充填治療后依然存在持續(xù)性根尖周感染，這可能與根內(nèi)感染、根外感染、異物反應(yīng)以及真性囊腫等諸多因素有關(guān)。而根管充填后殘留在根管內(nèi)的細菌是造成根管治療失敗的主要原因。根管治療失敗的根管內(nèi)存在的細菌與初次根管內(nèi)感染所發(fā)現(xiàn)的細菌完全不同。初次感染的根管內(nèi)存在的細菌主要為多種革蘭氏染色陰性的厭氧菌菌株。而二次感染的根管中檢測到的細菌類型僅為一種或幾種。糞腸球菌雖然是人體的正常菌群，但在無癥狀持續(xù)性根尖周感染和持續(xù)性根管內(nèi)感染

2、中常被檢測到。糞腸球菌在根管失敗的病例中占有很高的比例，并且可以在根管內(nèi)單獨生存或者是作為根管內(nèi)主要微生物的一種。盡管在未經(jīng)治療的根管內(nèi)糞腸球菌占有相當小的比例，但在根管充填治療后持續(xù)性的根尖周感染中起到了非常重要的作用?，F(xiàn)在的根管機械預(yù)備方法，沖洗方法和充填材料對于清除糞腸球菌需進一步完善。本論文主要研究在體外條件下，3種根管沖洗劑和3種根管充填劑對于根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性。 目的： (1)建立根管內(nèi)感染糞腸球菌的牙

3、齒模型。 (2)比較5.25％次氯酸鈉、2％氯已定、17％EDTA三種根管沖洗劑對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性。 (3)比較Acroseal、AH-plus、Cortisomol三種根管充填劑對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性。 (4)比較Acroseal、AHplus、Cortisomol三種根管充填劑各自隨時間對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性的變化。 (5)比較次氯酸鈉、氯己定、EDTA三種根管沖洗劑和Acroseai

4、、AHplus、Cortisomol三種根管充填劑聯(lián)合作用對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌活性以及其抗菌活性隨時間的變化。 方法： 1、常規(guī)消毒、開髓，去除入選離體牙(100顆)牙髓，不銹鋼K銼預(yù)備根管至40＃'，用17％EDTA、0.5％次氯酸鈉和蒸餾水沖洗根管，用樹脂封閉根尖孔。高壓蒸汽消毒滅菌后，選取2個標本進行培養(yǎng)，檢測滅菌效果。在確認所選標本無菌之后，將配制好的濃度約為1.0×108CFU/ml菌液以100μl/根管在3

5、0min內(nèi)接種完畢。將標本放于BHIA中，置于CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)3712培養(yǎng)。隔日更新BHIA培養(yǎng)基直至第21d。糞腸球菌培養(yǎng)至第21d時，隨機抽取2個標本，用API20strep試劑盒進行生化鑒定。 2、將根管內(nèi)已感染糞腸球菌的96顆離體牙隨機分為四組，每組為24顆牙。分別用新鮮配制的5.25％次氯酸鈉、2％氯已定、17％EDTA和0.9％Nacl作為根管沖洗劑沖洗根管，其中0.9％Nacl為陰性對照。在沖洗前和沖洗后分別提取

6、樣本。之后，進行細菌菌落計數(shù)。采用單因素方差分析計算和比較各組的CFU的變化。 3、從四組沖洗組中分別隨機抽取6顆牙組成新的充填組，每組也為24顆牙。用紙尖吸干根管內(nèi)液體后，分別用Acroseal氫氧化鈣根管封閉劑、AHPlus根管充填材料、Cortisomol根管充填材料和碳酸鈣充填根管，其中碳酸鈣為陰性對照。牙冠部分由可樂麗菲露光固化復(fù)合樹脂充填。將標本放于BHIA中，置于CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃培養(yǎng)。1周后，選擇每一標本的

7、根中位置，用慢速機，直徑為1mm的球鉆鉆孔進入根管，將鉆取的牙本質(zhì)碎屑立即倒入裝有無菌水的Eppendorf管中，小型振蕩器振蕩1min。取樣完畢后，將標本放入新的BHIA中，置于CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃繼續(xù)培養(yǎng)。3周后和5周后的樣本采集過程與1周后的操作相同。之后，對所取樣本進行細菌菌落計數(shù)。采用重復(fù)測量的方差分析計算和比較各組的CFU的變化。 結(jié)果： 1、通過各種細菌學(xué)鑒定方法，可以確定糞腸球菌已感染牙齒根管，并且確

8、定無雜菌污染，糞腸球菌感染牙齒根管模型成功建立。 2、沖洗前各組根管內(nèi)細菌數(shù)量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.023，P=0.995)。沖洗后各組根管內(nèi)細菌數(shù)量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=67.847，P=0.000)。通過沖洗劑的沖洗，各組根管內(nèi)細菌數(shù)量均有顯著下降(P<0.001)。沖洗后，各組之間CFU的減少量有統(tǒng)計學(xué)意義(F=103.060，P=0.000)。通過沖洗前后細菌量減少值的兩兩比較，5.25％次氯酸鈉、2％氯既定和1

9、7％EDTA組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但5.25％次氯酸鈉、2％氯既定和17％EDTA組的抗菌活性均明顯好于0.9％Nacl(P<0.001)。 3、沖洗劑分組(4組)因素主效應(yīng)(F=360.922，P=0.000)、充填劑分組(4組)因素主效應(yīng)(F=96.124，(F=0.000)、以及兩者的交叉處理分組(16組)因素主效應(yīng)(F=4.580，P=0.000)均有統(tǒng)計學(xué)意義；在組內(nèi)效應(yīng)及交互效應(yīng)的比較中，測量時間因

10、素主效應(yīng)(F=286.016，P=0.000)、沖洗劑分組因素與測量時間因素的交互效應(yīng)(F=6.044，P=0.000)、充填劑分組因素與測量時間因素的交互效應(yīng)(F=21.290，P=0.000)，沖洗劑分組因素、充填劑分組因素與測量時間因素的交互效應(yīng)(F=2.338，P=0.009)均有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1、糞腸球菌感染牙齒根管的模型可以在體外成功建立； 2、5.25％次氯酸鈉、2％氯已定、17％EDTA等

11、3種根管沖洗劑沖洗根管對根管內(nèi)糞腸球菌均有較好的抗菌效果，且抗菌效果無明顯差別，但三者均不能完全殺滅根管內(nèi)糞腸球菌； 3、Acroseal、AHplus、Cortisomol等3種根管封閉劑中，AHplus和Cortisomol對根管內(nèi)糞腸球菌均有較好的抗菌效果，AHplus的抗菌能力稍強于Cortisomoi，而Acroseal對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌效果較差，但三者也不能完全殺滅根管內(nèi)糞腸球菌； 4、5.25％次氯酸鈉