LRIG3對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15生物學(xué)特性影響的分子生物學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：明確膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15的生物學(xué)特征并探討EGF對GL15細(xì)胞系生物學(xué)特征的影響。
　　 方法：在連續(xù)培養(yǎng)的過程中，觀察膠質(zhì)母細(xì)胞瘤GL15細(xì)胞系的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)和生長增殖特性。免疫細(xì)胞化學(xué)方法行GFAP、PCNA染色，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，Transwell、MTT法檢測EGF對GL15細(xì)胞生物學(xué)特征的影響，并與U251MG和U373MG膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：GL1

2、5細(xì)胞形態(tài)為典型的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤形態(tài)，鏡下可見很多有絲分裂核細(xì)胞，細(xì)胞器發(fā)達(dá)，生長增殖活躍，具有克隆形成和侵襲能力。GFAP和PCNA分別在胞漿和胞核呈陽性表達(dá)。EGF可雙向調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖活性、侵襲性及GFAP蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：GL15細(xì)胞系保持了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的生物學(xué)特征，是研究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤很理想的細(xì)胞平臺。該細(xì)胞系的生物學(xué)特性與EGFR緊密相關(guān)。第二部分
　　 目的：探討表皮生長因子受體(EGFR)信號通路對人膠質(zhì)母

3、細(xì)胞瘤GL15細(xì)胞系細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。
　　 方法：甲基四唑蘭(MTT)和Transwell分別檢測表皮生長因子(EGF)，AG1478對GL15細(xì)胞增殖和侵襲力的影響，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot分別檢測EGF和AG1478作用后GL15細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：外源性的EGF雙向調(diào)節(jié)GL15細(xì)胞增生和生長，小劑量(50ng/ml，100ng

4、/ml)EGF能促進(jìn)細(xì)胞增生和提高細(xì)胞侵襲能力以及GFA/minRNA和蛋白表達(dá)，而大劑量(200ng/ml)則能降低其增殖和侵襲能力，AG1478則能明顯拮抗EGFR活性。
　　 結(jié)論：GL15膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的生物學(xué)特性與EGFR所在的7號染色體過度擴(kuò)增密切相關(guān)。EGF可雙向調(diào)節(jié)GL15細(xì)胞系的生長，AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的理想靶點(diǎn)。
　　 第三部分
　　 目

5、的：探討LRIG3調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15生物學(xué)行為的分子機(jī)制。
　　 方法：用LRIG3-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染GL15細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期的變化，MTT法和Transwell分析檢測EGF和AG1478對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖和侵襲的影響，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot分別檢測EGF作用于轉(zhuǎn)染后的GL15細(xì)胞EGFR和LRIG3蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：將質(zhì)粒LRIG3-E