高效氯氰菊酯對魚生物化學(xué)影響及鲇魚Nrf2基因的克隆.pdf

1、隨著農(nóng)藥使用量的逐步增加，導(dǎo)致環(huán)境污染也日趨加重，威脅著人類的健康。作者以高效氯氰菊酯為研究對象，研究其對魚的生物化學(xué)影響，并克隆了由高效氯氰菊酯誘導(dǎo)的調(diào)控Ⅱ相解毒酶基因和抗氧化蛋白基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子SiNrf2。此項(xiàng)研究對于降解環(huán)境中的農(nóng)藥以及有毒化合物，保護(hù)人類賴以生存的環(huán)境，具有重要的理論意義和實(shí)際價值。 高效氯氰菊酯對魚的生物化學(xué)影響研究包括其對鲇魚、鯉魚代謝酶、RNA和蛋白質(zhì)的影響研究。通過高效氯氰菊酯對鲇魚急性毒性研

2、究，確定高效氯氰菊酯對鲇魚的安全濃度為0.356μg/L。采用高效氯氰菊酯的安全濃度處理鲇魚和鯉魚，鲇魚和鯉魚的6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G-6-PDH)和乳酸脫氫酶(LDH)活性以及RNA和蛋白質(zhì)含量逐漸降低。撤離高效氯氰菊酯后，鲇魚和鯉魚的腦、腮、肝、骨骼肌肉中G-6-PDH和LDH酶活性、RNA和蛋白質(zhì)含量恢復(fù)到對照水平。研究結(jié)果表明高效氯氰菊酯對魚代謝酶，RNA和蛋白質(zhì)的生物化學(xué)影響顯著，撤離高效氯氰菊酯后能夠逆轉(zhuǎn)其對魚的生物化學(xué)影

3、響，G-6-PDH和LDH活性與蛋白質(zhì)含量呈正相關(guān)關(guān)系。高效氯氰菊酯能破壞魚的細(xì)胞新陳代謝。 分離獲得高效氯氰菊酯誘導(dǎo)的鲇魚幼苗mRNA，構(gòu)建cDNA文庫。用小鼠基因作探針，通過與鲇魚的cDNA文庫進(jìn)行原位雜交，克隆了鲇魚的Nrf2基因，命名為SiNrf2，其核苷酸長度為1761bp，編碼587個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與斑馬魚、小鼠、猩猩、青蛙Nrf2基因的氨基酸序列比較，同源性較高。轉(zhuǎn)錄因子SiNrf2具有6個功能Neh結(jié)構(gòu)域，

4、Neh1、Neh2、Neh3、Neh4、Neh5、Neh6。其中SiNrf2基因的Neh2結(jié)構(gòu)域與CNC家族成員Nrf1、小鼠Nrf2、CncC和SKN-1的Neh2結(jié)構(gòu)域同源性比較，Neh2的N端是高度保守的。SiNrf2基因的Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域與小鼠Nrf2、p45和Nrf1的Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域同源性比較，SiNrf2與p45和Nrf1的Neh5結(jié)構(gòu)域有高的同源性，與p45和Nrf1的Neh4結(jié)構(gòu)域沒有任何同源性。轉(zhuǎn)錄因