熒光核酸探針檢測Pb2+方法研究.pdf

1、隨著金屬制品、汽油、蓄電池、化學(xué)涂料等產(chǎn)品使用量的不斷增加以及工農(nóng)業(yè)三廢的排放,鉛以多種途徑廣泛進(jìn)入到人們的生活環(huán)境中,并呈加劇趨勢,不僅直接影響農(nóng)作物的生長發(fā)育、產(chǎn)量、品質(zhì)等,而且間接通過食物鏈對人體健康造成嚴(yán)重的危害,鉛污染已經(jīng)引起了廣泛關(guān)注。傳統(tǒng)的重金屬鉛檢測技術(shù)已經(jīng)難以滿足環(huán)境與食品安全監(jiān)控的需求,因此,建立方便、快速的重金屬鉛的檢測技術(shù)十分必要。
　　本研究以DNAzyme與金屬離子間的特異性為研究思路,以近年來新發(fā)展起

2、來的FRET為監(jiān)測手段,設(shè)計一種以DNAzyme為母體可以檢測重金屬Pb2+的熒光核酸探針,將核酸分析法結(jié)合發(fā)光方法,用于重金屬Pb2+的檢測,為加強(qiáng)我國環(huán)境和食品安全控制和監(jiān)督提供技術(shù)支持。在實驗中,首先,將8-17 DNAzyme增加了兩個“G-C”堿基對進(jìn)行增強(qiáng)熱穩(wěn)定性的結(jié)構(gòu)修飾,并標(biāo)記上一個熒光基團(tuán)“FAM”和兩個熒光淬滅基團(tuán)“Dabcyl”,設(shè)計成雙淬滅Pb2+熒光核酸探針P1;在探針P1的基礎(chǔ)上去掉底物鏈上的一個熒光淬滅基團(tuán)

3、“Dabcyl”,設(shè)計成單淬滅Pb2+熒光核酸探針P2;在探針P2的基礎(chǔ)上去掉增加的兩個“G-C”堿基對,設(shè)計成單淬滅Pb2+熒光核酸探針P3。并根據(jù)實際情況,采用溫度梯度法對三種核酸探針的熱穩(wěn)定性加以比較,探針P1的熱穩(wěn)定性最好,選取P1作為深入研究的材料。隨后研究了探針P1對Cd2+、Zn2+、Mg2+、Cu2+、Mn2+、Pb2+6種二價金屬離子的響應(yīng),結(jié)果表明探針P1對Pb2+具有很強(qiáng)的特異性,在探針濃度為2.5×10-7mol