肉桂醛和肉桂酸生物降解及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物跟蹤分析.pdf

1、本文開展了肉桂醛和肉桂酸生物降解及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物跟蹤分析，在建立了復(fù)雜生物反應(yīng)體系的定性定量分析方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了以肉桂醛、肉桂酸為底物的菌種篩選和轉(zhuǎn)化等方面的研究，取得的研究成果如下： (1)利用反相高效液相色譜法建立了可同時(shí)分析苯乙酮和肉桂酸的分析方法，確定色譜條件為：流動(dòng)相為甲醇：水：冰醋酸=55：45：0.05；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm,流速為1.0mL·min-1。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，得到苯乙酮、肉桂酸的線性方程分別為：Y=3

2、2017X-6298.6；Y=11286X-4508.7并進(jìn)行了精密度實(shí)驗(yàn)和回收率實(shí)驗(yàn)。 (2)研究了肉桂醛、苯甲醛和苯甲酸的紫外吸收光譜特征，建立了三組分紫外分光光度法測(cè)定含量的方法，結(jié)果表明，肉桂醛和苯甲醛在228nm和256nm波長(zhǎng)處有兩個(gè)等吸收點(diǎn)，利用等吸收點(diǎn)構(gòu)建了簡(jiǎn)單、快速的混合物定量分析方法，給出了各組分濃度與吸光度之間的關(guān)系，分別為C肉桂醛=(A311-0.0084)/0.0424；C苯甲醛=(A256-0.000

3、5)/0.0622-C肉桂醛；C苯甲酸=(A228+0.0057)/0.0611-C肉桂醛-C苯甲醛。其中肉桂醛的線性范圍：0-18.03μg·mL-1，苯甲醛的線性范圍：O-13.08μg·mL-1，苯甲酸的線性范圍：0-9.233μg·mL-1。其方法精密度的RSD均<1％，穩(wěn)定性的RSD均<1％。用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收試驗(yàn)，測(cè)定樣品回收率均在99％．101％之間。 (3)實(shí)驗(yàn)所用部分土樣分別在高峰林場(chǎng)、高峰桂油廠、玉林平南采

4、集，共122份土樣，進(jìn)行了菌種的分離和轉(zhuǎn)化肉桂醛為苯甲醛的能力實(shí)驗(yàn)，篩選出186株單一菌，其中有轉(zhuǎn)化能力的6株，從中選取轉(zhuǎn)化能力相對(duì)較高的一株菌(菌種5＃)，進(jìn)行了轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。對(duì)轉(zhuǎn)化能力較高的5＃菌種進(jìn)行了碳源、氮源、溫度、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH、裝液量等條件的優(yōu)化。結(jié)果顯示，以葡萄糖為碳源、牛肉膏為氮源、溫度保持在30℃，初始pH為5．0，裝液量為100mL時(shí)為最佳轉(zhuǎn)化條件，苯甲醛的含量可達(dá)5．24％。 (4)篩選到一株高轉(zhuǎn)

5、化能力的菌株，它能高效、高選擇性的將肉桂酸降解為苯乙酮。經(jīng)鑒定出該菌為伯克霍爾德氏菌屬的越南伯克氏菌(Burkholderiavietnamiensis)。 (5)對(duì)越南伯克氏菌轉(zhuǎn)化肉桂酸生成苯乙酮的反應(yīng)，進(jìn)行了優(yōu)化轉(zhuǎn)化研究，優(yōu)化條件為：以蔗糖為碳源，濃度為2g·L-1，蛋白胨為氮源，濃度為2.5g·L-1，30℃，發(fā)酵2.5d，轉(zhuǎn)化2d，轉(zhuǎn)化過程中pH為9.0．在最佳轉(zhuǎn)化條件下，轉(zhuǎn)化0.5g肉桂酸底物后，苯乙酮的含量可達(dá)3.2