菜籽蛋白酶水解及水解物的生物活性研究.pdf

1、目前國內(nèi)外有關(guān)酶解菜籽蛋白開發(fā)活性肽的研究報道，大多使用單一酶，對于使用雙酶組合水解菜籽蛋白及水解物的抗氧化活性的研究報道相對較少。本文以雙低菜籽為原料，對菜籽蛋白用雙酶組合進行水解，研究菜籽蛋白水解物的抗氧化活性，選出抗氧化活性較好的酶水解物進一步分離純化，再確定抗氧化活性較高的菜籽多肽的分子量范圍。此外，對不同水解度的菜籽多肽抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的活性也進行了研究，并與降壓藥卡托普利抑制ACE的活性進行相應(yīng)比較，為開發(fā)具有

2、抗氧化活性和降血壓功能的菜籽蛋白水解物提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　 本文通過分別使用Alcalase單酶和Alcalase與Flavourzyme雙酶結(jié)合相繼水解菜籽蛋白，并對水解物的抗氧化活性進行研究，確定菜籽蛋白水解物清除DPPH自由基能力和還原能力與酶的種類和水解度有關(guān)，其中經(jīng)雙酶相繼水解得到的水解物的還原能力和清除DPPH自由基的能力都大于單酶水解物，同時菜籽蛋白水解物的抗氧化能力還與其濃度有關(guān)，在一定濃度范圍內(nèi)提高蛋

3、白水解物濃度可相應(yīng)提高抗氧化能力。通過研究Na2SO3對中性蛋白酶、木瓜蛋白酶以及Flavourzyme水解菜籽蛋白的速率的影響，發(fā)現(xiàn)Na2SO3能明顯提高中性蛋白酶的水解速率和水解度，且Na2SO3對其的影響明顯大于對木瓜蛋白酶和Flavourzyme的影響，所以本文以中性蛋白酶水解菜籽蛋白，研究Na2SO3對其水解物的抗氧化性能的影響，包括對于水解物清除DPPH自由基活性、還原能力以及抑制亞油酸氧化活性的影響，確定使用Na2SO3對

4、菜籽蛋白進行前處理，可增加中性蛋白酶對菜籽蛋白的水解速率，并能增強水解物清除DPPH自由基活性、但降低水解物還原能力和抑制亞油酸氧化活性。使用中性蛋白酶分別與Alcalase、Protamex、Flavourzyme、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶相結(jié)合，用雙酶相繼水解菜籽粕，得到五組菜籽粕的雙酶水解物，通過對相應(yīng)水解物抗氧化活性的研究，確定所有水解物都具有一定清除DPPH自由基活性、還原能力和抑制亞油酸氧化活性，但以中性蛋白酶和胰蛋白酶組合的水

5、解物的活性最強。
　　 根據(jù)上述實驗結(jié)果，試驗對中性蛋白酶和胰蛋白酶結(jié)合的水解物作進一步研究。經(jīng)依次使用pellicon膜和Sephadex G-25凝膠柱分離后，得到四部分分子量不同的菜籽蛋白水解物，其中以分子量為6500Da－1050Da范圍的水解物清除DPPH自由基的活性最高，表明菜籽粕雙酶水解物的抗氧化活性取決于水解物的分子結(jié)構(gòu)，即不僅與酶的種類有關(guān)，還與水解條件和水解度有關(guān)。使用堿性蛋白酶(Alcalase2.4L)水