右旋糖酐酶純化與表征.pdf

1、右旋糖酐酶(Dextranase，EC3.2.1.11)是一種特異性水解α-1，6-糖苷鍵的蛋白酶，可以在相對(duì)溫和的條件下對(duì)右旋糖酐進(jìn)行高效率的催化水解。在甘蔗制糖工業(yè)中，由于甘蔗砍收后長(zhǎng)期堆放，車間設(shè)備衛(wèi)生條件不佳等原因會(huì)導(dǎo)致微生物感染后產(chǎn)生大量的右旋糖酐，而右旋糖酐會(huì)對(duì)后續(xù)工段的制糖工藝流程造成一系列干擾，最終導(dǎo)致了糖分回收率的下降以及產(chǎn)品質(zhì)量的降低右旋糖酐酶可以作為生物助劑加入到制糖工藝當(dāng)中，解決右旋糖酐所引起的一系列問題，因此研

2、究其發(fā)酵生產(chǎn)、提取純化以及相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)和保存方法都有相當(dāng)?shù)囊饬x。
　　 本文主要研究為使用畢赤酵母工程菌對(duì)右旋糖酐酶進(jìn)行組成型表達(dá)后的分離純化工作，即先通過選擇性沉淀、超濾的方法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行初步分離;然后，進(jìn)一步嘗試使用雙水相萃取法，通過不同鹽類、不同分子量的高聚物以及改變pH等方式，建立一套高效萃取右旋糖酐酶的工藝參數(shù)。
　　 其中，使用PEG4000-(NH4)2SO4雙水相系統(tǒng)進(jìn)行萃取，將PEG4000和(NH4)

3、2SO4終濃度都控制在13％，對(duì)粗酶液的萃取率和回收率都超過95％;最后，針對(duì)右旋糖酐酶的相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，確定其酶促反應(yīng)的最優(yōu)條件是45℃、pH為5.5以及底物濃度20mg/mL。酶蛋白活性受到Fe3+和Cu2+的抑制，而同時(shí)Mn2+和Fe2+則起到一定的促進(jìn)作用。在保存穩(wěn)定性上，右旋糖酐酶不耐受30℃以上的環(huán)境溫度，在4℃的偏酸性(pH5.0～5.8)環(huán)境中則可以長(zhǎng)期保持穩(wěn)定;在室溫下進(jìn)行保存時(shí)，加入30％的甘油，可使酶液在5周