靈芝(Ganoderma lucidum)漆酶發(fā)酵參數(shù)優(yōu)化及其在改善饅頭品質方面的研究.pdf

1、在本論文中，作者從河南省太行山上一株野生靈芝中分離到純靈芝菌種。其形態(tài)學特征為:菌蓋軟木質，呈腎性，紅褐色，表面漆樣光亮，有淺褶皺紋;菌肉厚約1cm，有白色管孔;菌柄偏生，紅栗褐色;菌絲呈絲狀，有分支，菌絲直徑為1.7-3.9μm;擔孢子褐色，卵圓形，雙層壁，外壁光滑，擔孢子大小為5.1-6.3μm×7.9-9.4μm。應用真菌ITS特異引物對該菌株ITS序列進行PCR擴增，獲得一段長度614bp的序列，經測序并登錄GenBank進行B

2、last比對，并使用MEGA3.1軟件的鄰近相鄰法構建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)該菌株和Ganodermalucidum(EU520247.1)的ITS序列相似性是100％。結合其形態(tài)特征和分子生物學鑒定，確定該菌種是Ganodermalucidum，命名為G.lucidumHSD06B。將該菌株ITS序列提交GenBank，登錄號為KC3511557。
　　對菌株G.lucidumHSD06B產漆酶的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。單

3、因素法和響應面法相結合確定其最適液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:葡萄糖38.5g/L，蛋白胨15.0g/L，麩皮21.1g/L，藜蘆醇0.8mM/L，多抗霉素0.02g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L。單因素法確定其最佳的發(fā)酵條件為:接種量10％，初始pH5.4，轉速180r/min，溫度28℃。以優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基在最佳的培養(yǎng)條件下發(fā)酵7d，菌株G.lucidumHSD06B產漆酶酶活達到50153U/L，比優(yōu)化

4、前(5082U/L)提高了約9.7倍。
　　靈芝漆酶粗酶液活性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗表明G.lucidumHSD06B漆酶包含三種同工酶，分別為Lac1、Lac2、Lac3，其中Lac1和Lac2漆酶蛋白的含量比Lac3高。菌株G.lucidumHSD06B粗酶液通過硫酸銨分級沉淀、疏水層析兩步分離純化后，得到三種漆酶復合物，純化倍數(shù)4.6，回收率為38％。G.lucidumHSD06B漆酶同工酶的分子量分別為:Lac1:62.6

5、kDa;Lac2:64.5kDa;Lac3:65.9kDa。
　　初步研究了靈芝漆酶對饅頭品質的影響和闡述其改善饅頭品質的機理。靈芝漆酶能增加饅頭比容，隨著漆酶添加量的增加，饅頭比容逐漸增大，當漆酶添加量為2.0u/g時，饅頭的比容增加11％。饅頭感官品質評估結果指出，適量的漆酶能顯著改善饅頭的感官品質，但饅頭感官得分隨著酶濃度的增大而降低，在靈芝漆酶添加量為0.5U/g面粉時，饅頭感官得分最高（88.5分），這比對照組（76.3

6、分）高出12.2分。此外，和對照組比起來，當漆酶添加量為0.5U/g，饅頭氣孔更小、更加均勻和有規(guī)則，但是，當漆酶濃度＞0.5U/g時，饅頭氣孔明顯變大且不規(guī)則。饅頭質構分析表明漆酶能增加饅頭的硬度和咀嚼性，但是對彈性和回復性的影響很小。饅頭顯微結構分析指出，漆酶可以催化小麥蛋白的交聯(lián)，改善面筋網絡結構，同時伴隨著淀粉顆粒的膨大和聚集。SDS-PAGE電泳實驗進一步證實漆酶能催化小麥蛋白的交聯(lián)。以上結果說明漆酶能明顯改善饅頭的品質，作為