重組人白細胞介素-1α(rhIL-1α)的畢赤酵母表達及生物學作用研究.pdf

1、人白細胞介素-1α(hIL-1α)在抗腫瘤等方面具有潛在的應用價值。目前，重組hIL-1α(rhIL-1α)表達主要是通過大腸桿菌表達系統(tǒng)，但大腸桿菌表達系統(tǒng)存在蛋白分離純化工藝復雜等缺點。
　　酵母表達系統(tǒng)具有蛋白表達后修飾及分離純化工藝簡單等優(yōu)點，本文構(gòu)建了rhIL-1α畢赤酵母工程菌，挑選表達量高的菌株，在1L搖瓶和3L發(fā)酵罐規(guī)模下進行了表達條件的優(yōu)化，在10L和50 L發(fā)酵罐規(guī)模進行了樣品的獲取、產(chǎn)物純化工藝以及初步的活性

2、研究。為rhIL-1α的產(chǎn)業(yè)化研究奠定了基礎。主要研究包括:
　　1、本研究對hIL-1α的cDNA序列進行設計和優(yōu)化，采用pPICZαA作為目的基因的表達載體，通過電轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至X-33畢赤酵母。通過基因組PCR鑒定，MM和MD平板篩選，SDS-PAGE鑒定等方法篩選得到高表達且遺傳穩(wěn)定的rhIL-1α工程菌。
　　2、在1L搖瓶規(guī)模下對rhIL-1α工程菌的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明，在pH5.5、26℃、甲醇

3、濃度0.25％條件下，rhIL-1α的表達量最高(19 mg/L)。
　　3、在3L發(fā)酵罐規(guī)模下對rhIL-1α工程菌的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明，在pH5.5、26℃、甲醇濃度0.25％條件下，rhIL-1α的表達量最高(180 mg/L)。
　　4、擴大發(fā)酵規(guī)模獲取樣品。在pH5.5、26℃、甲醇濃度0.25％條件下，10L和50L發(fā)酵罐中的表達量分為251 mg/L和307 mg/L。
　　5、對rhIL-1α的