重組人CXCL8(3-72)-G31P干預(yù)小鼠非酒精性脂肪肝研究.pdf

1、背景:脂肪肝是由一種或多種誘因引起的以肝細(xì)胞脂肪變性及脂質(zhì)蓄積為特征的臨床病理性綜合征。臨床根據(jù)有無過量飲酒史可分為酒精性脂肪肝(AFLD)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)。NAFLD包括由肝內(nèi)脂肪堆積（脂肪變性）發(fā)展至肝組織不同程度的壞死、炎癥反應(yīng)和纖維化(NASH)的一系列肝臟疾病，甚至進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌。同樣，做為慢性炎癥疾病的NAFLD與2型糖尿病及心血管疾病的發(fā)生有明顯的相關(guān)性，所以NAFLD在世界范圍內(nèi)的高患病率已成

2、為威脅人類健康疾病之一。然而到目前為止，沒有直接且有效的方法治療這種疾病。所以，未來非酒精性脂肪肝治療的重點應(yīng)該放在動物模型的機械研究，基于細(xì)胞活動的臨床試驗以及將生活方式的干預(yù)和針對主要信號通路與脂質(zhì)代謝、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)的藥物治療相結(jié)合。
　　 目的:非酒精性脂肪肝(NAFLD)是由多種因素導(dǎo)致的一種慢性炎癥疾病，在慢性炎癥反應(yīng)中NAFLD的各個發(fā)展階段以可溶性細(xì)胞因子和趨化因子為基礎(chǔ)，調(diào)控炎癥細(xì)胞的功能與存活。白細(xì)胞介素

3、-8(IL-8)作為趨化因子ELR+CXC家族中的主要成員，與NAFLD的發(fā)生發(fā)展關(guān)系極為密切。G31P是通過對人IL-8基因定點突變獲得的IL-8類似物，其可高親和力結(jié)合CXCR1/2而無生物學(xué)活性，使其成為理想的IL-8受體CXCR1/2的拮抗劑。已知G31P在中性粒細(xì)胞相關(guān)的感染治療上有明顯的療效。而且已經(jīng)證實G31P對高脂血癥小鼠的血管壁炎性因子表達(dá)有抑制作用，對冠狀動脈硬化的發(fā)生發(fā)展起到很好的預(yù)防和治療的作用。這個發(fā)現(xiàn)為G31

4、P是否可能預(yù)防和治療非酒精性脂肪肝提供新的思路。本研究主要觀察G31P對高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD小鼠肝組織學(xué)、血脂、血清TNF-α、IFN-γ、IL-8、KC水平的影響，以及對肝組織細(xì)胞增生和肝纖維化發(fā)生的干預(yù)作用。
　　 方法:1）建立非酒精性脂肪肝小鼠模型（12只），G31P治療組小鼠模型(12只)，正常對照組小鼠模型（6只），HE染色觀察各組肝臟病理學(xué)變化;2）小鼠眼眶取血后通過離心的方法制備血清，試劑盒檢測血清中CHO、

5、TG、HDL、LDL和血清ALT;3）ELISA檢測血清中KC(IL-8)含量，RT-PCR檢測KC(IL-8)和其受體CXCR2在mRNA水平的表達(dá)，免疫組化方法檢測組織CXCR2表達(dá)情況;4）RT-PCR檢測各組小鼠肝組織中TNF-α、IFN-γ炎癥因子mRNA的表達(dá);5）小鼠肝組織增殖相關(guān)因子的檢測，免疫組化檢測各組肝組織MEF2A、PCNA表達(dá)情況，RT-PCR檢測各組肝組織mRNA水平MEF2A、PCNA的表達(dá)情況;6）小鼠肝

6、纖維化相關(guān)因子檢測:免疫組化檢測各組肝組織MMP-2、MMP-9表達(dá)情況，RT-PCR檢測各組肝組織mRNA水平MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1）高脂飼料喂養(yǎng)小鼠8個月成功建立非酒精性脂肪肝模型(NAFLD)，同時以G31P連續(xù)干預(yù)建立G31P(500ug/kg)治療組，結(jié)果顯示:NAFLD模型組小鼠體重明顯增加，G31P治療組小鼠體重與NAFLD模型組相比顯著下降。通過病理組織學(xué)觀察，G31P明顯改善NAFL

7、D模型組小鼠肝組織脂肪變性及炎癥活動;2)G31P降低高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠血清CHO、LDL、TG含量以及血清谷丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平，同時血清中HDL水平升高;3）G31P降低NAFLD模型組中血清KC(IL-8)含量和KC（IL-8）在肝組織中的表達(dá)，G31P抑制KC(IL-8)的受體CXCR2在肝組織中的表達(dá);4）G31P明顯降低小鼠肝組織炎癥因子TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表達(dá);5）G31P抑制小鼠肝非酒精性脂肪肝