TfR1-SNPA424G的蛋白表達(dá)及與低氧訓(xùn)練效果的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)定點(diǎn)突變與構(gòu)建原核表達(dá)系統(tǒng)，觀察 TfR1/SNPA424G對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響，為探討該SNP位點(diǎn)作為有氧運(yùn)動(dòng)能力分子標(biāo)記的分子調(diào)控機(jī)理，同時(shí)探討TfR1/SNPA424G作為預(yù)測(cè)低氧訓(xùn)練效果分子標(biāo)記的可行性。
　　方法:
　　以突變前后的TfR1基因片段作為研究對(duì)象，將人工堿基合成的TfR1基因部分片段，插入表達(dá)載體pET-28α，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒TfR1-PET-28α，轉(zhuǎn)化大腸埃希

2、菌BL21(DE3)，獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子，利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)觀察TfR1-His融合蛋白表達(dá)情況。利用Ni-NTA His Bind親和層析柱純化His-TfR1融合蛋白，制備純化的重組TfR1蛋白。通過(guò)圓二色譜檢測(cè)并分析突變前后融合蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的差異。以72名北京體育大學(xué)男學(xué)生為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行4周HiHiLo，于低氧訓(xùn)練前1天，低氧訓(xùn)練第

3、4、7、16、23、30天取靜脈血，分析血象指標(biāo)、遞增負(fù)荷中血氧飽和度(Pulse oximetry，SpO2)、肌氧含量（Muscle oxygen content，MOC）等生理指標(biāo)的變化，觀察 SNP/A424G與HiHiLo效果的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:
　　圓二色譜分析顯示，突變后融合蛋白的最低峰所在波長(zhǎng)由200 nm變?yōu)?20 nm，且峰度降低。突變前的融合蛋白組成為α螺旋12.9％，β折疊46.0%，轉(zhuǎn)角13.5%