Sjogren-Larsson綜合征ALDH3A2基因突變篩查及致病機(jī)理研究.pdf

1、目的：對一例 sjogren-Larsson綜合征（Sjogren-Larsson syndrome,SLS）患者的ALDH3A2基因進(jìn)行突變檢測和功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。研究SLS患者ALDH3A2基因突變的類型和特點(diǎn)，為進(jìn)一步研究ALDH3A2基因突變導(dǎo)致SLS的致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
　　方法：該實(shí)驗(yàn)對象為山東省青島市1例SLS患兒及其父母。采集患兒及其父母外周靜脈血并提取DNA，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Rea

2、ction，PCR)擴(kuò)增ALDH3A2基因編碼區(qū)的全部外顯子并測序。本實(shí)驗(yàn)第二部分對在ALDH3A2基因篩查中發(fā)現(xiàn)的新突變(c.723C＞G)進(jìn)行功能學(xué)研究。從新鮮的肝組織中提取RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，設(shè)計(jì)相應(yīng)引物擴(kuò)增ALDH3A2全編碼基因，構(gòu)建ALDH3A2野生型真核表達(dá)載體，利用定點(diǎn)誘變試劑盒構(gòu)建ALDH3A2突變體，對野生型表達(dá)載體和突變型表達(dá)載體進(jìn)行正反向測序驗(yàn)證。用野生型和突變型質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染人皮膚成纖維細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后收集、裂

3、解細(xì)胞，提取總蛋白，用多功能酶標(biāo)儀檢測突變對脂肪醛脫氫酶活性的影響，與野生型比較分析得出突變體活性的改變。
　　結(jié)果：在受檢者ALDH3A2基因發(fā)現(xiàn)c.723C＞G（編碼區(qū)第723號(hào)核苷酸由C變?yōu)镚）、c.1157A>G（編碼區(qū)第1157號(hào)核苷酸由A變?yōu)镚）的復(fù)合雜合核苷酸變異，上述變異分別導(dǎo)致第241號(hào)氨基酸由Cys變?yōu)門rp（p.Cys241Trp）、第386號(hào)氨基酸由Asn變?yōu)镾er（p.Asn386Ser），均為錯(cuò)義變異。

4、受檢者其父在位點(diǎn)c.723發(fā)現(xiàn)C＞G的雜合變異，其母該位點(diǎn)未見異常；受檢者其母在位點(diǎn)c.1157發(fā)現(xiàn)A>G的雜合變異，其父該位點(diǎn)未見異常。對野生型和突變型表達(dá)載體進(jìn)行酶活檢測，與野生型相比較，c.723C＞G造成FALDH活性的降低。
　　結(jié)論：在受檢者 ALDH3A2基因所發(fā)現(xiàn)的復(fù)合雜合變異分別遺傳自受檢者其父母，父母均為雜合子，該變異是導(dǎo)致受檢者發(fā)病的致病性變異。變異c.1157A>G的致病性已經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道，與Sjoegren-