ZAG對高脂喂養(yǎng)C57BL-6J小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、目的：通過高脂喂養(yǎng)建立C57BL/6J小鼠非酒精性脂肪肝模型，觀察鋅alpha-2糖蛋白（Zinc-alpha2-glycoprotein，ZAG）過表達對非酒精性脂肪肝的脂質(zhì)代謝的影響，探討ZAG對非酒精性脂肪肝的的保護作用及機制。
　　方法：8周齡清潔級雄性C57BL/6J小鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分成2組：普通飼養(yǎng)（Standard-fat diet，SFD）組10只和高脂飼養(yǎng)（High-fat diet，HFD）組3

2、0只。SFD組給予普通飼料，HFD組給予高脂飼料。每周測一次體重，記錄值。飼養(yǎng)20周后從HFD組隨機抽取10只小鼠予以滴度2×1011v.g的腺相關(guān)病毒載體rAAV2-ZAG-GFP1ml尾靜脈注射（HFD+ZAG），10只予以相同滴度rAAV2-GFP1ml尾靜脈注射（HFD+vector），均繼續(xù)予以高脂飼料喂養(yǎng)4周。留取血清，酶法測定TG、TC、LDL、HDL含量，ELISA檢測血清FFA含量；留取肝臟、皮下和睪周脂肪組織，取適量

3、以10％甲醛溶液浸泡固定，制成石蠟切片以行HE染色；酶法檢測肝臟TG、TC、FC、CE含量；qRT-PCR及Western Blot技術(shù)，檢測小鼠肝臟ZAG mRNA和蛋白的表達水平；WesternBlot技術(shù)檢測代謝性核受體及相關(guān)蛋白如固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP1c）、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARα）、肝X受體(LXR)、法尼酯X受體（FXR）、脂肪酸轉(zhuǎn)位酶（CD36）、脂肪酸轉(zhuǎn)移蛋白（FATP4）、脂肪酸結(jié)合蛋白

4、（FABP）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰輔酶A去飽和酶-1（SCD1）、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1（CPT1）、解偶聯(lián)蛋白-1（UCP1）的表達水平。
　　結(jié)果：HFD、HFD+Vector組小鼠較SFD組出現(xiàn)明顯肥胖，體重增加（P<0.05），脂肪細胞體積明顯增大。血清TC、TG、LDL水平升高（P<0.05），HDL水平稍有升高（P>0.05），F(xiàn)FA水平顯著升高（P<0.01），肝臟TG、TC、FC、CE均顯著升高（P<0.

5、01），CE/TC%水平分別比SFD組升高57.5%、63%。肝臟ZAG mRNA明顯降低（P<0.01），ZAG蛋白水平與SFD組比較無明顯差異（P>0.05）。PPAR a、CPT1、 SCD1蛋白表達與SFD組無差異（P>0.05），F(xiàn)XR蛋白表達降低（P<0.05），UCP1蛋白的表達下降明顯（P<0.01）；SREBP1c、LXR、FABP蛋白的表達升高（P<0.05），CD36、FATP4、FAS蛋白表達升高最為顯著（P<0

6、.01）。ZAG過表達組較HFD、HFD+vector組小鼠體重、肝臟重量明顯減輕（P<0.05），脂肪細胞體積變小，血清 TG、LDL、FFA和肝臟 TG、TC、FC、CE水平均顯著降低（P<0.01）,CE/TC%水平降低53.2%。ZAG mRNA和蛋白明顯升高（P<0.01），F(xiàn)XR、CPT1蛋白表達升高（P<0.05），PPARa、UCP1蛋白表達明顯升高（P<0.01）；LXR、FABP、SCD1蛋白表達下降（P<0.05）

7、，SREBP1c、CD36、FATP4、FAS蛋白的表達下降最明顯（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1. ZAG能夠減輕小鼠體重，縮小脂肪細胞體積，降低血清TG、LDL含量，具有降脂減肥的作用；
　　2. ZAG能減輕肝臟重量，減少肝臟脂滴數(shù)量，降低肝臟TG、TC、FC、CE、CE/TC%水平，改善非酒精性脂肪肝；
　　3. ZAG通過抑制肝臟TG合成及攝取相關(guān)因子SREBP1c、LXR、CD36、FATP4、