一種新型免疫檢測載體聚羥基丁酸戊酸酯微球的制備及應用.pdf

1、目前免疫檢測中所用的固相載體絕大部分都是由不可降解的高分子材料制備的。隨著免疫檢測項目的增多，載體用量也會快速增加，使用后載體材料的后續(xù)處理變得越來越麻煩。一方面會增加垃圾處理量，另一方面若處理不當會對環(huán)境造成污染，因此尋找一種可降解材料來制備免疫檢測的載體具有十分重要的意義。
　　本文以可完全降解的生物高分子材料聚(3-羥基丁酸戊酸酯)(PHBV)為原料，采用雙重乳液法，將其制成微米級微球，并對PHBV微球制備工藝參數進行了優(yōu)化

2、;首次將PHBV微球用作免疫檢測的載體材料，并以纖維連接蛋白(FN)為檢測對象，建立了相應的FN免疫檢測方法;為了簡化微球免疫檢測中復雜的洗滌過程，通過引入Fe3O4納米粒子制備了磁性PHBV微球，并用于FN的免疫檢測，成功地簡化了洗滌過程，縮短了檢測用時。
　　在采用雙重乳液法制備了PHBV微球的研究中，通過顯微鏡觀察、掃描電鏡測試、電導滴定法測羧基含量等手段對微球進行表征?？疾炝巳軇舛取⑷榛瘎舛?、乳化轉速、油水相的比例等對

3、微球制備的影響。綜合考慮微球粒徑、均勻度、分散性等因素，確定了制備PHBV微球的較優(yōu)工藝條件為:初乳化轉速為8000rpm，復乳化轉速為1500rpm，PHBV濃度為5％w/v，PVA的濃度為1％w/v，W1/O的比例為1∶10，(W1/O)/W2的比例為1∶10;此條件下制備的微球粒徑為5～15μm，分散性好，微球表面的羧基含量可達到3mmol/g。
　　以自制的PHBV微球為固相載體來檢測FN，實驗研究結果表明檢測過程最佳參數

4、為:微球用量4mg，效價比為1∶32羊抗人FN抗體，酶標抗體的稀釋倍數為2000。此時FN的檢測下限為1μg/ml，檢測上限為100μg/ml。對待測血清和標準樣品的FN濃度進行檢測，結果表明PHBV微球作為載體的檢測結果與酶標板的檢測結果是一致的，但是酶標板的檢測總用時要超過6.5h，而微球檢測總用時僅為3.5h。由此可見PHBV微球可以用作免疫檢測中的固相載體，并且可以明顯縮短檢測用時。
　　為了進一步簡化PHBV微球作載體時

5、免疫檢測中復雜的離心洗滌步驟，通過共沉淀法成功制備了共混型磁性PHBV微球，并將其用于FN的免疫檢測。實驗結果表明在Fe3O4納米粒子的投入量為100mg，PVA濃度為3％w/v，反應時間為4h時，制備的磁性PHBV微球分散性好，磁性能強，表面羧基含量約為3.0mmol/g，粒徑在5～20μm之間。將該磁性PHBV微球用于FN的免疫檢測，其檢測結果與PHBV微球和酶標板作載體時的檢測結果一致，此時以磁分離洗滌代替離心洗滌使檢測過程總用時