不同品系比格犬部分血液學(xué)指標(biāo)及遺傳多態(tài)性分析.pdf

1、近年來，隨著生物學(xué)領(lǐng)域研究的迅速發(fā)展，實驗用比格犬（Beagle）在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究中的作用越來越突出，對比格犬質(zhì)量的要求也越來越高，因此保證比格犬優(yōu)良品質(zhì)和高重復(fù)性的生物學(xué)特性顯得十分重要。故本試驗進行不同體型比格犬部分血液學(xué)指標(biāo)的檢測及遺傳多態(tài)性分析，在保持種群穩(wěn)定的基礎(chǔ)上以期獲得高質(zhì)量的實驗用比格犬并為動物模型的篩選打基礎(chǔ)。
　　試驗一不同品系比格犬不同生長時期血液生化指標(biāo)的檢測
　　篩選出不同體型的比格犬，大中小體型種犬

2、30只，公母各半；按生理期不同選取泌乳期母犬30只；懷孕期母犬30只；育成犬30只，公母各半。本試驗對比格犬的14項血液生化指標(biāo)進行檢測分析。結(jié)果：獲得不同體型種犬、不同生理時期比格犬血液生化指標(biāo)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差范圍。試驗結(jié)果表明泌乳期母犬血清中TG的濃度明顯低于其他不同生理期的比格犬（P＜0.05）；泌乳期母犬和懷孕期母犬血清中 T-Bil的濃度明顯顯低于其他生理期的比格犬（P＜0.05）。T-Pro、Alb、BUN、UA、Cre、T

3、-cho、CPK、GOT、GPT、Ca、TG、GLU這12項生化指標(biāo)在不同品系、不同生理期的變化不大，并沒有顯著差異，可以作為標(biāo)準(zhǔn)參考值。本研究結(jié)果可作為新藥比格犬長毒試驗中各項測試的正常值參考。
　　試驗二不同品系比格犬外周血單核細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群的檢測
　　通過對健康成年比格犬三個品系：大體型（Charles River）、中體型（Cavens）、小體型（自繁）外周血單核細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞免疫表型分布的調(diào)查，建立相應(yīng)的正

4、常參考范圍。選擇健康成年比格犬三個品系各30只，血樣用三色特異性T淋巴細(xì)胞亞群及單色單核細(xì)胞熒光抗體進行熒光標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測 CD14、CD3、CD4、CD8標(biāo)記的樣品。結(jié)果(1)成年健康比格犬外周血白細(xì)胞中單核細(xì)胞占比分析發(fā)現(xiàn)大體型比格犬明顯高于其他兩組有顯著差異；(2) CD4+淋巴細(xì)胞在 T淋巴細(xì)胞中占比分析發(fā)現(xiàn)大體型比格犬明顯高于其他兩組有顯著差異；(3) CD8+淋巴細(xì)胞在T淋巴細(xì)胞中的占比分析發(fā)現(xiàn)中體型比格犬明顯高于其他

5、兩組有顯著差異；(4) CD4+/CD8+分析發(fā)現(xiàn)小體型明顯高于其他兩組有顯著差異。由實驗得出結(jié)論：大體型比格犬自身免疫能力比較強，小體型比格犬具有數(shù)據(jù)比較穩(wěn)定、體型小、容易操作等優(yōu)點，小體型比格犬更適合做實驗動物。建立了各個品系的淋巴細(xì)胞免疫表型及單核細(xì)胞的參考范圍。
　　試驗三不同品系比格犬血清腫瘤標(biāo)志物含量檢測
　　本研究擬對大、中、小體型三個品系的健康成年比格犬血清腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA、CA125、CA153、C

6、A199進行檢測，用犬腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199 ELISA試劑盒，對97只健康成年大體型比格犬、228只中體型比格犬、63只小體型比格犬的血清進行相關(guān)腫瘤標(biāo)志物濃度測定，為比格犬腫瘤模型篩選提供參考。試結(jié)果表明，小體型比格犬血清中AFP、CA125、CA153、CEA的濃度明顯低于其他兩個品系犬（P＜0.05）；而CA199的濃度明顯高于中體型比格犬（P＜0.05）。大體型比格犬血清中AFP、CEA、

7、CA125、CA153的濃度最高，小體型比格犬血清中 CA199最高，推測認(rèn)為大體型比格犬患消化系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)腫瘤的風(fēng)險較高，小體型比格犬患腺癌的風(fēng)險較高，也為動物模型的開展提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　試驗四不同品系比格犬遺傳多態(tài)性分析
　　本研究擬對大、中、小體型三個品系的健康成年比格犬遺傳多樣性進行檢測，分析該群體在DNA水平上的遺傳多樣性。采用國際動物遺傳學(xué)會（ISAG）及相關(guān)文獻中篩選出的8對微衛(wèi)星引物，對大、中、小體型比格