Yippee轉(zhuǎn)基因果蠅品系的建立及基因功能的初步研究.pdf

1、翰溯失幸碩士學(xué)位論文rj加ee轉(zhuǎn)基因果蠅品系的建立及基因功能的初步研究學(xué)科專業(yè)學(xué)位類型研究生姓名導(dǎo)師姓名、職稱論文編號(hào)生物化學(xué)及分子生物學(xué)口科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位彭忠祿吳秀山教授湖南師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室二零零八年十月摘要心臟發(fā)育是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的過程，在分子機(jī)理上被一套進(jìn)化上保守的轉(zhuǎn)錄因子(NKZ、MEFZ、GATA、Tbx和H等)控制，它們決定心臟細(xì)胞的發(fā)育方向，決定了編碼收縮蛋白基因的表達(dá)和心臟結(jié)構(gòu)形態(tài)的建成。同時(shí)，它們?cè)谏窠?jīng)發(fā)生

2、、心肌細(xì)胞發(fā)生、血細(xì)胞發(fā)生和癌細(xì)胞發(fā)生過程中也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。本文研究的衛(wèi)藝朋ee基因編碼一個(gè)高度保守序列的鋅指結(jié)合蛋白，從真菌到人類的68種真核生物中都發(fā)現(xiàn)了它的同源蛋白。州即ee在果蠅發(fā)育的不同階段以及在人類胎兒的不同組織中廣泛表達(dá)，提示衛(wèi)分pee可能具有重要的生物學(xué)功能。2003年，通過酵母雙雜交作用繪制的果蠅蛋白相互作用圖譜顯示，衛(wèi)藝即ee基因通過‘谷了另76基因與心臟發(fā)育相關(guān)基因Wg、MefZ等有聯(lián)系，即衛(wèi)藝即ee基因可

3、能影響心臟發(fā)育調(diào)控基因的信號(hào)途徑，故推測衛(wèi)藝朋ee可能與心臟發(fā)育相關(guān)。我們采用RT一PCR的方法擴(kuò)增果蠅廠萬朋ee基因cDNA，構(gòu)建puAs一YIPPee一工REs一GFP綠色熒光過表達(dá)質(zhì)粒，再通過果蠅胚胎顯微注射和mini一white標(biāo)記基因篩選建立了轉(zhuǎn)基因果蠅品系。將該轉(zhuǎn)基因品系與H一GAL4雜交、朋A干擾品系分別與Hand一GFP品系雜交，在熒光顯微鏡下觀察雜交后代的心管和淋巴腺的表型改變，以期來確定萬朋ee基因在心臟發(fā)育調(diào)控中的