中國大頭蛙群系統(tǒng)關系研究及大頭蛙和脆皮大頭蛙線粒體全基因組測序.pdf

1、本文由文獻綜述和研究報告兩個部分組成：
　　一、文獻綜述
　　對大頭蛙屬動物和大頭蛙屬分類地位的相關研究進行了概述，包括大頭蛙屬中國產(chǎn)大頭蛙三個物種的形態(tài)、習性、分類及細胞生物學和核酸水平的研究。發(fā)現(xiàn)大頭蛙屬動物染色體數(shù)目出現(xiàn)多樣性，及Emerson et al.(2000)和 Evanset al.(2003)將采集的大頭蛙屬30多個種暫分為四大群，其中，中國大頭蛙群只列出了臺灣產(chǎn)大頭蛙一種。
　　二、研究論文

2、>　　1、分別測定了福建大頭蛙5個居群、大頭蛙2個居群和脆皮大頭蛙1個居群的多個個體12S和16S rRNA部分基因，選取每個居群內(nèi)序列差異大于0.5％的兩條序列，采用NJ法和MP法，構建了大頭蛙屬中國大頭蛙群各居群間的系統(tǒng)進化樹；從Genbank中下載了30多個大頭蛙屬其他物種的相應序列，以近源種澤陸蛙、虎紋蛙、倭蛙、棘蛙為外群，采用MP法和ML法重建了大頭蛙屬分子系統(tǒng)樹。結果表明：中國大頭蛙群三個種均為有效種；支持費梁對大頭蛙屬中國

3、大頭蛙群的劃分；推測中國大頭蛙群為大頭蛙屬的“第五群”。
　　2、將已測定的澤陸蛙、黑斑蛙、非洲爪蟾的mt DNA全序列進行軟件比較分析，設計了20對引物，對大頭蛙屬大頭蛙（產(chǎn)于云南）進行了全序列的擴增、測序和拼接，獲得大頭蛙線粒體基因組全序列并進行生物信息學分析。大頭蛙線粒體基因組全序列全長為16867bp，并登陸GenBank，登陸號為：AY899241。運用DNASTAR、Sequin3.0、tRNA Scan-SE1.21

4、等軟件，對其進行了各基因定位，發(fā)現(xiàn)大頭蛙線粒體基因組包括19個tRNA基因、2個rRNA基因、13個蛋白質(zhì)編碼基因和1個D-loop區(qū)。在定位的19個tRNA基因中，有兩個重復拷貝的tRNA-Met；與一般脊椎動物線粒體相比，有4個tRNA基因缺失，其中編碼tRNA-Cys和 tRNA-Glu基因的相應序列突變成了假基因，如此多的基因缺失在脊椎動物中還是首次報道；同時發(fā)現(xiàn) tRNA-Ser(AGY)、ND5和ND6三個基因間間出現(xiàn)85b

5、p和63bp的基因間間隔。
　　3、采用同樣的引物和方法，測定了脆皮大頭蛙（產(chǎn)于海南）線粒體基因組全序列，其全長為16640bp，并登錄GenBank，登錄號為AY899242。運用DNASTAR、Sequin3.0、tRNA Scan-SE1.21等軟件，對各基因進行了定位，其中包括17個tRNA基因（同樣具有兩個一前一后tRNA-Met的重復拷貝）、2個rRNA基因、13個蛋白質(zhì)編碼基因和1個D-loop區(qū)。與一般脊椎動物線粒