DNA甲基化作為法醫(yī)學(xué)組織標(biāo)記的可行性研究.pdf

1、背景：鑒別在犯罪現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)的斑痕等人體檢材的組織來(lái)源，對(duì)判斷案件類型和證明犯罪事實(shí)有重要的作用。當(dāng)代法庭科學(xué)對(duì)微量、陳舊生物證據(jù)的應(yīng)用，使組織鑒別變得更為必要，同時(shí)在技術(shù)是也提出了更高的要求。探索新型的分子組織標(biāo)記，研究開(kāi)發(fā)與當(dāng)代DNA分析技術(shù)相匹配的組織鑒別技術(shù)，是目前法醫(yī)物證學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。
　　 目的：本研究調(diào)查人體主要組織膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)基因和D

2、EAD盒多肽4(DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp)box polypeptide 4，DDX4)基因的啟動(dòng)子甲基化水平，評(píng)估GFAP啟動(dòng)子低甲基化作為腦組織、DDX4啟動(dòng)子低甲基化作為精液斑組織標(biāo)記的可行性，初步探討DNA甲基化作為法醫(yī)組織標(biāo)記的意義。
　　 方法：應(yīng)用聯(lián)合亞硫酸氫鹽的限制酶法(Combined Bisulfite Restriction Analysis，COBRA)，一種半定量的DNA甲基化檢測(cè)技術(shù)

3、，調(diào)查6例尸體主要組織(大腦、心臟、肺、肝、胰、脾、腎、皮膚)和17例精液的GFAP和 DDX4啟動(dòng)子甲基化水平，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析并確定判別值。
　　 結(jié)果：人類大腦組織GFAP啟動(dòng)子甲基化水平均低于45.82％(-Xbrain=44.70[％]，Sbrain=8.38[％])，非腦組織均高于58.60％(-Xnon-brain=68.01[％]，Snon-brain=1.42[％])，以52.87[％]為判別值，可以有

4、效的區(qū)別腦組織與非腦組織。人精液DDX4啟動(dòng)子甲基化水平均低于50.41％(-Xsperm=11.52[％]EcoRI，11.88[％]TaqI；Ssperm=8.98[％]EcoRI，10.25[％]TaqI)，體細(xì)胞組織均高于75.41％(-Xsomatic=82.73[％]EcoRI，82.94[％]TaqI；Ssomatic=3.54[％]EcoRI，3.91[％]TaqI)，以49.85[％](EcoRI位點(diǎn))或50.58[％

5、](TaqI位點(diǎn))為判別值，可以有效的區(qū)別精液斑組織與非精液斑組織。
　　 結(jié)論：大腦組織的GFAP啟動(dòng)子甲基化水平顯著低與非腦組織，精液DDX4啟動(dòng)子甲基化水平顯著低與非精液的體細(xì)胞組織，GFAP啟動(dòng)子低甲基化可作為腦組織特異標(biāo)記，DDX4啟動(dòng)子低甲基化可作為精液特異標(biāo)記。考慮到法醫(yī)學(xué)檢材的特殊性和DNA標(biāo)記的優(yōu)勢(shì)，組織特異性甲基化變異位點(diǎn)(methylation-variable positions，MVPs)可能是一種理想