肝微粒體酶CYP2C9、CYP2D6和CYP3A對(duì)艾瑞昔布在大鼠體內(nèi)代謝的影響.pdf

1、目的:建立LC-MS/MS測(cè)定大鼠血漿中艾瑞昔布濃度的方法，并對(duì)艾瑞昔布在大鼠體內(nèi)的代謝進(jìn)行研究探索，完善其藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　方法:
　　色譜條件:色譜柱為Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈∶水∶甲酸(85∶15∶0.1，V/V/V)，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL，內(nèi)標(biāo):甲苯磺丁脲。
　　質(zhì)譜條件:離子化方式:電噴霧離子化源(elect

2、rospray ionization，ESI);檢測(cè)方式:正離子檢測(cè);掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reactionmonitoring，MRM);離子源噴射電壓5500 V;離子源溫度:550℃;氣簾氣壓力:40 psi;霧化氣(GS1，N2)壓力:40 psi;輔助氣(GS2，N2)壓力:40 psi;碰撞氣壓力:6 psi;艾瑞昔布的解簇電壓(declusteringpotential，DP)和碰撞電壓(collisio

3、n energy，CE)值分別為100 V和45eV，甲苯磺丁脲的DP和CE值分別為22 V和32 eV;用于定量分析的離子反應(yīng)質(zhì)荷比(mass-charge ratio，m/z)分別為370.1→236.2（艾瑞昔布）和271.2→155.0（甲苯磺丁脲）。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法:健康雄性SD大鼠80只，隨機(jī)分為四組。四組大鼠分別灌胃給予蒸餾水、胺碘酮（40 mg·kg-1）、帕羅西汀(2 mg·kg-1)和酮康唑(20 mg·kg

4、-1)。連續(xù)給藥7天，1次/d。四組大鼠均于第8天灌胃給予艾瑞昔布(20 mg·kg-1)并分別于給藥前(0 min)和給藥后10 min、20min、30 min、45 min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h于眼底靜脈叢取血0.5 mL，6500×g離心10 min后取血漿200μL，冷凍保存。
　　血漿處理方法:取血漿200μL，加內(nèi)標(biāo)溶液20μL，渦旋混勻10s，加提取劑乙酸乙酯1mL，渦旋混

5、勻1 min，4500×g離心8 min，取上清液于1.5 mL離心管中，40℃水浴氮?dú)獯蹈桑?00μL流動(dòng)相復(fù)溶，10μL進(jìn)樣測(cè)定。
　　藥動(dòng)學(xué)參數(shù)處理方法:采用DAS2.0軟件對(duì)每只大鼠的系列血藥濃度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)矩自動(dòng)擬合并得到藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，采用SPSS13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。若比較的兩組參數(shù)均服從正態(tài)分布，則選用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，若其中一組不服從正態(tài)分布，則選用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P

6、值小于0.05認(rèn)為兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:艾瑞昔布的保留時(shí)間為2.27 min，甲苯磺丁脲的保留時(shí)間為2.26min，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)其濃度的測(cè)定無(wú)干擾;標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.016 X+0.072(r=0.9997);艾瑞昔布低(20 ng·mL-1)、中(80 ng·mL-1)、高(320ng·mL-1)三個(gè)濃度的方法回收率依次為102.2％，98.71％和97.01％，提取回收率分別為61.65％，65.33％和72

7、.57％，甲苯磺丁脲的提取回收率為51.64％;艾瑞昔布低、中、高三個(gè)濃度的日內(nèi)RSD分別為8.8％，2.8％和1.9％，日間RSD分別為7.4％，2.0％和1.9％;艾瑞昔布血漿樣品于-40℃低溫保存30天及反復(fù)凍融三次后性質(zhì)穩(wěn)定，且處理后的血漿樣品于4℃放置12h對(duì)測(cè)定無(wú)影響。
　　對(duì)照組大鼠體內(nèi)艾瑞昔布的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下:AUC0-t:1125.1±457.6mg·h·L-1, AUC0-∞:1331.3±592.6 mg·h

8、·L-1, t1/2:7.4±3.8 h,Tmax:1.5±0.6h,CL:0.02±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.17±0.07 L·kg-1和 Cmax:162.2±53.0mg·L-1。合用胺碘酮后，大鼠體內(nèi)艾瑞昔布的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下:AUC0-t:1814.8±693.4 mg·h·L-1, AUC0-∞:2091.6±887.1 mg·h·L-1, t1/2:7.8±4.5h,Tmax:1.7±0.6 h，CL:0.0

9、1±0.01 L·h-1·kg-1，V:0.11±0.05 L·kg-1和Cmax:268.2±115.7 mg·L-1。合用帕羅西汀后，大鼠體內(nèi)艾瑞昔布的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下:AUC0-t:1485.5±480.3 mg·h·L-1，AUC0-∞:1730.4±606.5 mg·h·L-1，t1/2:7.3±5.2 h，Tmax:1.5±0.7h，CL:0.01±0.01 L·h-1·kg-1，V:0.12±0.06 L·kg-1和Cmax

10、:192.1±70.6 mg·L-1。合用酮康唑后，大鼠體內(nèi)艾瑞昔布的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下:AUC0-t:1191.9±626.7 mg·h·L-1，AUC(0-∞):1391.0±692.0 mg·h·L-1，t1/2:8.0±4.2 h，Tmax:1.5±0.7 h，CL:0.02±0.01L·h-1·kg-1，V:0.19±0.11 L·kg-1和Cmax:159.0±70.5 mg·L-1。與對(duì)照組相比，合用胺碘酮后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0

11、-t，AUC0-∞，Cmax均明顯增大，CL，V明顯減小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;合用帕羅西汀后，AUC0-t，AUC0-∞，Cmax顯著增大，CL顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;合用酮康唑后，所有組間的差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:本文所建立的LC-MS/MS測(cè)定艾瑞昔布濃度的方法，簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于大鼠體內(nèi)血漿中艾瑞昔布濃度的測(cè)定。
　　合用胺碘酮后，大鼠體內(nèi)艾瑞昔布的暴露率增大，清除減慢，說(shuō)明艾瑞昔布