桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒藥學(xué)及毒理研究.pdf

1、桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒是由桂枝、炙甘草、龍骨、煅牡蠣四味藥組成，具有鎮(zhèn)靜安神，收斂固澀之功效，臨床上用于治療心陽(yáng)虛所致的心悸、心煩、失眠、胸悶、身躁、乏力、精神萎靡見上述癥候者。本課題為新藥中藥天然藥物注冊(cè)分類六類[1]，是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，應(yīng)用現(xiàn)代制藥技術(shù)和方法，對(duì)桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒的藥學(xué)及毒理進(jìn)行了系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究，確保制備工藝科學(xué)合理，藥品制劑安全有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控。
　　 一、立題依據(jù)
　　 本方來(lái)源于《傷寒

2、論》中的經(jīng)方桂枝甘草龍骨牡蠣湯《傷寒論》118條:“火逆下之，因燒針煩躁者，桂枝甘草龍骨牡蠣湯主之?！惫鹬σ粌桑ㄈテぃ?，甘草二兩（炙），牡蠣二兩（熬），龍骨二兩。上四味，以水五升，煮取二升半去滓。溫服八合，日三服[2]。
　　 本方中桂枝溫通心陽(yáng)，和暢心氣，炙甘草溫補(bǔ)心氣，與桂枝相用，溫陽(yáng)補(bǔ)陽(yáng);龍骨鎮(zhèn)靜安神，使神明內(nèi)守，煅牡蠣潛鎮(zhèn)浮陽(yáng)之躁動(dòng)，與龍骨合用潛鎮(zhèn)安神[3～4]。
　　 國(guó)家食品藥品監(jiān)管局發(fā)布施行《中藥注冊(cè)管理補(bǔ)

3、充規(guī)定》[5]，其規(guī)定項(xiàng)下第七條、第八條著重對(duì)中藥復(fù)方制劑的分類進(jìn)行了細(xì)化，增加了“來(lái)源于古代經(jīng)典名方的中藥復(fù)方制劑”和“主治為證候的中藥復(fù)方制劑”兩個(gè)類別，突出中醫(yī)藥特色、繼承傳統(tǒng)的思想。
　　 二、制備工藝的研究
　　 水提取工藝:采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳提取工藝條件。結(jié)果水提取工藝條件為:加入10倍加水量，提取三次，每次提取兩小時(shí)。
　　 水提液濃縮工藝:以物料干燥情況為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察了濃縮溫度、濃縮程度。結(jié)

4、果:水提液在80℃以下減壓濃縮，至相對(duì)密度1.18～1.23(60℃)之間即可。
　　 制劑成型工藝:通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)考察了不同稀釋劑及用量對(duì)制粒情況影響，并考察了顆粒的堆密度、臨界相對(duì)濕度、休止角情況影響。
　　 結(jié)果:清膏相對(duì)密度在1.18～1.23(60℃)之間，用清膏-輔料(1∶2)的比例加入糊精，將二者混勻，制粒，干燥，整粒，即得。
　　 三、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　 TLC定性研究:采用TLC法對(duì)桂枝甘

5、草龍骨牡蠣湯顆粒中所含桂枝、炙甘草2味藥材進(jìn)行了鑒別。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品色譜中，在對(duì)照藥材或?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無(wú)干擾。且經(jīng)多次試驗(yàn)，重現(xiàn)性良好。
　　 HPLC含量測(cè)定研究:采用HPLC法測(cè)定了桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒中甘草苷含量，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.05％磷酸溶液（三乙胺調(diào)Ph至5.0）(18∶82)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不

6、低于5000。并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明該方法合理可行，重現(xiàn)性好，可用于桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒的質(zhì)量控制。
　　 本品每克含炙甘草以甘草苷計(jì)不得低于1.20mg。
　　 四、藥物穩(wěn)定性研究
　　 本品在加速試驗(yàn)條件和室溫條件下觀察6個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定，各批加速穩(wěn)定性和長(zhǎng)期穩(wěn)定性炙甘草甘草苷含量RSD小于1.0％，質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)9、12、18、24個(gè)月繼續(xù)觀察中。
　　 本品以藥用

7、復(fù)合膜為內(nèi)包材，結(jié)果表明使用此包裝材料具有合理性;根據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果，初步擬定本品有效期為24個(gè)月。
　　 五、毒理研究
　　 通過(guò)灌胃給予大鼠90天桂枝甘草龍骨牡蠣湯顆粒，研究本品所產(chǎn)生的長(zhǎng)期毒性反應(yīng)及其程度。應(yīng)用SPF級(jí)SD大鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組30只進(jìn)行試驗(yàn)。分組設(shè)高（5.85g浸膏/kg），中(2.93g浸膏/kg)，低（1.46g浸膏/Kg）（分別相當(dāng)于人臨床擬用量的60、30和15倍）三個(gè)

8、劑量組和空白對(duì)照組。大鼠灌胃給藥，每天給藥一次，連續(xù)90天。每周記錄動(dòng)物體重及攝食量。給藥結(jié)束后，每組處死20只動(dòng)物，進(jìn)行臟器系數(shù)、血液學(xué)指標(biāo)、血清生化學(xué)、血清電解質(zhì);每組剩余10只動(dòng)物停藥30天作恢復(fù)期觀察及檢查。結(jié)果整個(gè)試驗(yàn)期間大鼠整體狀況較好，體重正常增加，體重和攝食量各劑量組與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著意義;臟器系數(shù)各劑量組與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著意義;血液學(xué)指標(biāo)、血清生化學(xué)、血清電解質(zhì)各劑量組與對(duì)照組比較差異也無(wú)顯著意義;組織病理學(xué)檢