組織細胞DNA降解與死亡時間的相關(guān)性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:摸索運用末端轉(zhuǎn)移法、原位末端標記法及瓊脂糖電泳法研究機體死后不同時間段DNA的降解程度及規(guī)律,探討該規(guī)律在推斷死亡時間方面的可行性,為實際工作中推斷死亡時間提供一個科學的依據(jù)。 方法:取SD大白鼠,頸椎錯位處死,置于室溫20℃的環(huán)境下,在死后不同時間段(0h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、24h、36h及48h)取材,所取檢材為肝、腎、脾,按照取材死后時間段的不同分為12組。課題共分三個部分:第一部分:

2、運用末端轉(zhuǎn)移法檢測DNA降解:剪碎組織,酚氯仿提取組織DNA;紫外可見分光光度計在260nm、280nm波長處檢測DNA提取液的吸光度值,獲得DNA的純度和濃度;每個死亡時間段均取1ug DNA,加入5U TdT酶、5nmoldUTP,在37℃水浴中相互反應1h;用無水乙醇和乙酸銨共沉淀DNA,保留液體:紫外可見分光光度計在260nm波長處檢測液體中反應剩余的dUTP的吸光度。第二部分:運用原位末端標記法檢測DNA降解:組織用10%中性

3、多聚甲醛固定;常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋,切片;組織印片制作,甲醛固定;用細胞凋亡檢測試劑盒檢測,步驟按照試劑盒說明書;脫水、透明、中性樹酯封片;顯微鏡下觀察,拍照,圖像分析。第三部分:酶切瓊脂糖電泳檢測DNA降解:取1ug DNA加2U MluI酶,酶切后瓊脂糖電泳,溴化乙錠染色,觀察結(jié)果。 結(jié)論:機體死后組織細胞DNA隨死亡時間延長而不斷降解,并具有一定的規(guī)律性。末端轉(zhuǎn)移法與原位末端標記法都具有敏感性強、易操作等優(yōu)點,綜合運用,可

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