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文檔簡介
1、該文利用發(fā)根農(nóng)桿菌A4,R1601菌株和ATCCl5834菌株侵染高山紅景天,通過對外植體的選擇、外植體最適生長條件的優(yōu)化、農(nóng)桿菌侵染條件的優(yōu)化、除菌條件的優(yōu)化、毛狀根生長條件的優(yōu)化,建立了高山紅景天的毛狀根培養(yǎng)系統(tǒng).研究表明,農(nóng)桿菌A4;R1601;ATCCl5834侵染高山紅景天能產(chǎn)生毛狀根,其中,ATCCl5834和A4菌株侵染率高;外植體以葉片最好,發(fā)根農(nóng)桿菌菌液濃度在OD<,600>=0.4~0.5;乙酰丁香酮濃度為50μmo
2、l/L;侵染時間為25分鐘;共培養(yǎng)時間為2天;共培養(yǎng)的培養(yǎng)基的pH值為5.0;抑菌培養(yǎng)基添加"羧芐青霉素150 mg/l+頭孢霉素100mg/l"的培養(yǎng)條件最佳.PCR檢測結(jié)果表明:所獲得的高山紅景天毛狀根在500bp處有與rolC基因相同大小條帶存在.PCR-Southern分子雜交檢測進一步證明了該條帶是rolC基因,高山紅景天基因組中整合了來源于Ri質(zhì)粒的T-DNA基因.轉(zhuǎn)化的毛狀根在不添加外源激素的培養(yǎng)基上自主地快速生長并表現(xiàn)出
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