痛瀉要方對IBS模型大鼠FOS蛋白表達的影響.pdf

1、目的：
　　1.IBS是一種以平滑肌功能失調(diào)、內(nèi)臟高敏感性、腸道菌群失調(diào)作為重要臨床特征的慢性疾病。據(jù)報道歐美地區(qū)發(fā)病率為10％-20％,我國發(fā)病率為5％-12％。其發(fā)病原因復(fù)雜，罹及全身多臟器病變涉及腸道動力障礙、內(nèi)臟感覺異常、腦腸軸紊亂、心理因素、腸道菌群失調(diào)，從而出現(xiàn)腹痛、腹脹、排便行為和大便性狀異常。多年來，IBS研究發(fā)展緩慢而不盡如人意。究其原因，IBS研究多采用急性應(yīng)激動物模型，單純性地對胃腸動力和內(nèi)臟感覺等進行癥狀化

2、地描述，這就在某種程度上阻礙了IBS治療學(xué)的發(fā)展。對于臨床研究的不足我們采用動物實驗來彌補，特別是有關(guān)倫理問題和隨后可能會出現(xiàn)偏倚的臨床研究。因此，表現(xiàn)直觀、可反復(fù)構(gòu)建的IBS動物模型對進一步研究、了解IBS的易感因素、發(fā)病機制和疾病預(yù)防都有非常積極的作用。建立一個涉及消化道動力改變、感覺和行為異常等多因素同時存在的動物模型，不僅可以為探討這種疾病的發(fā)病機理創(chuàng)造有利條件，還可以驗證中樞神經(jīng)系統(tǒng)在IBS發(fā)病中的意義。本研究采用中西醫(yī)結(jié)合的

3、方式構(gòu)建一種新型IBS大鼠模型，目的為IBS這種臨床常見病的基礎(chǔ)研究提供更完善的動物模型。
　　2.對于IBS的治療，臨床上西醫(yī)無特效藥，治療方面，認為IBS癥狀是由鈣通道被異常的激活、增加的鈣內(nèi)流導(dǎo)致的動作電位增多的結(jié)果，所以臨床采用鈣通道阻滯劑使病人癥狀緩解，但實際效果不盡人意。但中醫(yī)采用辯證的方法治療IBS具有深厚的歷史且效果明顯，但機制不清。本研究采用中醫(yī)治療泄瀉型IBS的經(jīng)典方，即痛瀉要方，對IBS泄瀉型大鼠進行治療，闡

4、述中藥防治IBS的科學(xué)性和作用靶點，即中藥治療為身心同治，使大鼠的泄瀉癥狀有所緩解并且使大鼠的腦部海馬區(qū)FOS蛋白含量有所下降，可為IBS防治與藥物研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.本研究采用已被廣泛應(yīng)用的慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激的方法構(gòu)建的經(jīng)典IBS腹瀉型大鼠模型，即經(jīng)典的抑郁模型。并根據(jù)呂紅、譚潔描述的方法進行整合，盡量模擬臨床IBS病因與發(fā)病癥狀，復(fù)合情志與證候多因素建立慢性多因素應(yīng)激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型。

5、慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激讓大鼠難以預(yù)料將會面臨何種刺激，而處于焦慮兼恐懼狀態(tài)；高糖高脂飼料、高溫高濕環(huán)境加酒精刺激，是較為成熟的脾胃濕熱造模方法。本實驗聯(lián)合上述兩種方法，運用中西醫(yī)結(jié)合的方式，制作新型IBS大鼠模型，這種大鼠模型可以較好地模擬人類脾胃濕熱腹瀉型IBS病因病機及發(fā)病癥狀。
　　2.本研究以痛瀉要方為治療藥，對泄瀉型IBS模型大鼠進行治療，對大鼠的腦、腸進行HE染色，對腦部情緒中樞海馬區(qū)進行免疫組化檢測，用平均光密度對免

6、疫組化結(jié)果進行統(tǒng)計，揭示痛瀉要方調(diào)控IBS模型大鼠腦部海馬區(qū)內(nèi)FOS含量的影響，闡述中藥防治IBS的科學(xué)性和作用靶點。
　　3.本研究對治療后的大鼠腦部海馬區(qū)及結(jié)腸組織進行病理檢測及免疫組化檢測，發(fā)現(xiàn)IBS病理結(jié)果和正常組對比并無差異，說明IBS是一種功能性疾病并無器質(zhì)性改變。另外IBS泄瀉型大鼠經(jīng)中藥痛瀉要方治療后腦部海馬區(qū)FOS含量有所下降，說明痛瀉要方治療本病的作用靶點不只在腸部而且作用在腦，這與西醫(yī)一直以來認定的IBS病理

7、機制即腦-腸軸機制基本吻合。
　　結(jié)果：
　　1.本實驗在一定時間內(nèi)綜合運用糞便性狀評分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實驗、糖水?dāng)z取量等)等檢測方法，獲得每只造模動物的5項指標(biāo)。其中的各項指標(biāo)與正常組比較，慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激模型組和慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱動物模型組有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01)；與慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激模型組比較，慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱動物模型組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P

8、<0.01)。
　　2.經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組比較，模型組各項指標(biāo)如糞便性狀評分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為、心理等，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01)，痛瀉要方組和雙歧桿菌組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05)；與模型組比較，痛瀉要方組及雙歧桿菌組體重有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05)；與痛瀉要方組比較，雙歧桿菌組體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05)。
　　3.通過大鼠的腦、腸進行HE染色，對腦部進行免疫組化檢測，平均光密度進行統(tǒng)計

9、發(fā)現(xiàn)，組與組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），顯示痛瀉要方能降低海馬FOS表達，推測痛瀉要方對中樞FOS變化有調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)論：
　　1.本研究制作新型IBS大鼠模型，即慢性多因素應(yīng)激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型，能較好地模擬IBS的病因病機及臨床表現(xiàn)，該復(fù)合模型與人類脾胃濕熱泄瀉型IBS的病因病機及臨床表現(xiàn)，有較好的可重復(fù)性，并且可以持續(xù)數(shù)月?？捎糜谥嗅t(yī)、西醫(yī)基礎(chǔ)研究。
　　2.本研究中痛瀉要方在IBS治療

10、中注重疏肝健脾、心身同治，分別從癥狀、病機等角度入手，充分展示了IBS的情志病因和心身整體特征。當(dāng)大鼠出現(xiàn)情志抑郁、焦慮、飲食減少、體質(zhì)量減輕、倦怠乏力、排便次數(shù)增加及大便稀軟等癥狀表現(xiàn)時可能與海馬FOS表達升高有關(guān)。痛瀉要方能降低海馬FOS表達，推測痛瀉要方對中樞FOS變化有調(diào)節(jié)作用。中樞FOS的變化可能參與了IBS泄瀉型腦-腸互動機制。
　　3.本研究對腦部海馬區(qū)FOS蛋白表達進行免疫組化檢測，發(fā)現(xiàn)治療后大鼠海馬FOS蛋白表達