LIM家族蛋白Ajuba對腫瘤細胞的生物學功能與分子機制研究.pdf

1、第一部分LIM家族蛋白Ajuba對結腸癌腫瘤細胞遷移的作用研究
　　目的探索結直腸癌細胞中Ajuba與Twist之間的相互作用，及該作用對于結直腸癌遷移所產生的影響。方法運用免疫共沉淀方法證明外源性Ajuba與Twist蛋白質之間存在相互作用；熒光素酶活性檢測Ajuba對于Twist下游靶基因N-cadherin啟動子的轉錄活性；構建結直腸癌SW1116-shAjuba/OEAjuba穩(wěn)轉細胞，并進行Transwell侵襲實驗觀察

2、細胞遷移能力變化。結果Ajuba與Twsit蛋白質之間存在相互作用，并且Ajuba能通過Twist促進N-cadherin的表達調控。在結直腸癌細胞SW1116-shAjuba穩(wěn)轉細胞中可發(fā)現(xiàn)，AJUBA基因表達水平降低，蛋白表達下降，能抑制細胞遷移能力。結論Ajuba是轉錄因子Twist的共活化因子（coactivator），能夠促進N-cadherin表達，增強結直腸癌細胞的遷移能力。
　　第二部分LIM蛋白Ajuba對乳腺癌

3、細胞的生物學作用與分子機制研究
　　目的探索Ajuba在雌激素受體α（Estrogen receptorα,ERα）陽性的乳腺癌細胞中的生物學作用，依據已知的Ajuba與ERα存在相互作用尋找涉及的分子機制。方法運用免疫共沉淀方法證明外源性Ajuba與ERα蛋白質之間存在相互作用；構建乳腺癌T47D-shAjuba、T47D-oeAjuba穩(wěn)轉細胞，并進行CCK8實驗觀察細胞生長能力變化；建立T47D-shERα穩(wěn)轉細胞，比較生長

4、趨勢改變；熒光素酶活性檢測Ajuba-ERα對于下游靶基因CDK6啟動子的轉錄活性調控。結果Ajuba與ERα之間存在相互作用，并且Ajuba能通過ERα促進CDK6的表達調控。在乳腺癌細胞T47D-shAjuba穩(wěn)轉細胞中可發(fā)現(xiàn)，AJUBA基因表達水平降低，蛋白表達下降，細胞生長緩慢；細胞中過表達Ajuba，則可上調CDK6的表達水平。結論Ajuba是ERα的共活化因子（coactivator），能夠促進CDK6表達，參與調控乳腺癌細