細粒棘球蚴內(nèi)蒙株核酸疫苗構(gòu)建及在真核細胞中的表達.pdf

1、細粒棘球蚴病是由細粒棘球絳蟲(Echinociccinae granulosus；Eg)的幼期細粒棘球蚴寄生于人或動物體內(nèi)所引起的一種重要的人畜共患寄生蟲病。不同宿主和地理環(huán)境的細粒棘球蚴間存在實質(zhì)性的基因遺傳差異，具有明顯的地理株特點。FABP和Eg95是免疫預(yù)防細粒棘球蚴病很有前途的疫苗侯選分子?？寺”镜叵x株的疫苗候選基因構(gòu)建核酸疫苗對于細粒棘球蚴病的預(yù)防具有較好的針對性和特異性。 利用PCR技術(shù)擴增細粒棘球蚴內(nèi)蒙株FABP

2、基因，T載體克隆測序。FABP-DNA序列全長482bp，與已報道的國內(nèi)新疆株FABP-DNA同源性為100％；與國外株FABP-DNA同源性為99％，表明FABP基因具有地理株差異。克隆的FABP-cDNA序列全長402bp，推導(dǎo)ORF為399bp，編碼133個氨基酸，序列與由基因DNA序列外顯子推導(dǎo)出的編碼序列一致，編碼蛋白質(zhì)的分子量為15.095Kda。 FABP-cDNA片段亞克隆到原核表達載體pET44a(+)上構(gòu)建重

3、組質(zhì)粒pET-FABP，在E. coli BL(21)中誘導(dǎo)表達了預(yù)期大小的目的蛋白并純化，進而免疫小鼠制備了效價高、特異性強的多克隆抗體。 利用本研究克隆的細粒棘球蚴內(nèi)蒙株FABP-cDNA和本實驗室保存的EG95-cDNA構(gòu)建真核表達載體pEGFP-FABP和pEGFP-EG95，轉(zhuǎn)染綿羊胎兒成纖維細胞，結(jié)果表明FABP-cDNA和EG95-cDNA可以在真核細胞中與綠色熒光蛋白融合表達。將FABP-cDNA和EG95-cD