阿托伐他汀后處理抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善心肌缺血-再灌注損傷.pdf

1、研究背景:急性心肌梗死是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的最嚴(yán)重類(lèi)型，在世界范圍內(nèi)，仍是導(dǎo)致死亡的常見(jiàn)原因之一。目前治療心肌梗死的方法多以介入，冠脈搭橋或溶栓為主要手段的再灌注治療;隨之而帶來(lái)的是再灌注損傷問(wèn)題，缺血再灌注損傷是急性心肌梗死病人接受再灌注治療后病情加重甚至危及生命的主要原因之一。缺血預(yù)處理和缺血后處理能調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制減輕再灌注損傷，但是由于反復(fù)短暫的缺血/再灌注本身具有損傷，限制了其臨床應(yīng)用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)藥物后處理具有良好

2、的臨床應(yīng)用前景，其中羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑即他汀類(lèi)藥物除了降低血清膽固醇水平外還具有獨(dú)立于降脂作用外的多種療效，被稱(chēng)為“他汀多效性”，可以顯著降低冠心病特別是急性心肌梗死患者的發(fā)病率、心血管病相關(guān)的死亡率，并且顯著降低全因死亡率。他汀類(lèi)藥物后處理改善心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制目前尚不清楚。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞中重要細(xì)胞器，既是損傷感知也是凋亡信號(hào)整合的主要位點(diǎn)，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激被認(rèn)為是改善心肌缺血再灌注損傷的新靶點(diǎn)。本系列以往研究已經(jīng)證

3、實(shí)，缺血后處理可以通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善心肌缺血再灌注損傷，故本研究以阿托伐他汀作為藥物后處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型進(jìn)行干預(yù)，假設(shè)阿托伐他汀后處理抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善心肌缺血再灌注損傷。
　　研究目的:本課題研究旨在證實(shí)阿托伐他汀后處理具有改善心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　研究方法:
　　1.大鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型的建立并隨機(jī)分組:雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組（

4、每組n=12）。
　　(1)假手術(shù)(Sham)組:開(kāi)胸后于前降支穿線(xiàn)但不結(jié)扎;
　　(2)缺血/再灌注損傷組(I/R):結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支導(dǎo)致心肌缺血45分鐘，再灌注24小時(shí)至結(jié)束實(shí)驗(yàn);
　　(3)缺血后處理組(I-postC):缺血45分鐘后，再灌注10秒，再缺血10秒，如此反復(fù)3輪，再灌注24小時(shí)至結(jié)束實(shí)驗(yàn);
　　(4)小劑量阿托伐他汀后處理組(PPC0.5mg):缺血45分鐘后，再灌注前5分鐘腹腔內(nèi)注射阿托

5、伐他汀0.5mg/kg，再灌注24小時(shí)至結(jié)束實(shí)驗(yàn);
　　(5)大劑量阿托伐他汀后處理組(PPC2mg):缺血45分鐘后，再灌注前5分鐘腹腔內(nèi)注射阿托伐他汀2 mg/kg,再灌注24小時(shí)至結(jié)束實(shí)驗(yàn)。
　　2.心肌平均血流灌注量檢測(cè):采用PeriCam PSI血流視頻監(jiān)測(cè)系統(tǒng)和PIM血流成像系統(tǒng)軟件進(jìn)行平均血流灌注量的檢測(cè)。
　　3.再灌注24小時(shí)后進(jìn)行心肌損傷標(biāo)志物（LDH，TNI）檢測(cè)。
　　4.血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè):

6、指標(biāo)包括心率(HR)，左心室內(nèi)壓上升/下降的最大速率(±dp/dtmax)，平均動(dòng)脈壓(MAP)，左心室舒張末壓（LVEDP）。
　　5.采用TTC染色方法進(jìn)行各組心肌梗死面積檢測(cè)。
　　6.采用TUNEL方法進(jìn)行各組心肌細(xì)胞凋亡率檢測(cè)。
　　7.采用Western blot方法對(duì)各組危險(xiǎn)區(qū)心肌組織進(jìn)行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡分子檢測(cè):指標(biāo)包括GRP78，CRT，CHOP，Caspase12，BCL-2及BAX表達(dá)。

7、　　8.統(tǒng)計(jì)分析:對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS15.0進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行各組間的比較，組間的兩兩比較采用最小顯著差異法（LSD）;計(jì)數(shù)資料的比較采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.阿托伐他汀后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　(1)各組在各時(shí)間段平均血流灌注量雖無(wú)顯著差異，但I(xiàn)-

8、postC， PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較有增加趨勢(shì);
　　(2)I/R組與Sham組比較顯著降低±dp/dtmax，顯著增加LVEDP，顯著降低MAP;I-postC， PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較顯著增加±dp/dtmax;在LVEDP方面，I-postC，PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較雖無(wú)顯著差異，但有下降趨勢(shì);在MAP方面，PPC2mg組與I/R組比較顯著增加，I-pos

9、tC組和PPC0.5mg組與I/R組比較無(wú)顯著差異;各組心率無(wú)顯著差異;
　　(3)I/R組與Sham組比較顯著增加心肌損傷標(biāo)志物(LDH，TNI)水平，I-postC，PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較顯著降低心肌損傷標(biāo)志物(LDH，TNI)水平;
　　(4) I-postC， PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較顯著減少（TTC染色）心肌梗死面積;
　　(5)與Sham組比較，I/R組心肌細(xì)胞

10、凋亡率顯著增加，與I/R組比較，I-PostC組，PPC0.5mg組及PPC2mg組心肌細(xì)胞凋亡率顯著減少。
　　2.阿托伐他汀抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡分子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　(1)I/R組與Sham組比較顯著上調(diào)GRP78，CRT，CHOP，Caspase12，BCL-2及BAX表達(dá);
　　(2) I-postC，PPC0.5mg及PPC2mg組與I/R組比較顯著下調(diào)GRP78，CRT，CHOP和Caspase12表i，P