海洋類固醇降解菌初步研究.pdf

1、汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文I摘要環(huán)境激素是指環(huán)境中具有與人和動物體內(nèi)激素相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用的一類化學(xué)物質(zhì)。這一類化合物進(jìn)入人體發(fā)揮激素的作用；影響體內(nèi)激素的合成、運(yùn)輸、釋放和代謝；擾亂內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)的功能；造成機(jī)體免疫和生殖等功能的障礙。以雌激素及其類似物為主的類固醇激素是環(huán)境激素中的一類。目前已經(jīng)在近海水域中檢測到超過正常水平的雌激素。鑒于微生物在降解和環(huán)境污染物治理中所具有的獨(dú)到的優(yōu)勢，本文擬初步探索海洋微生物降解類固醇

2、激素的可能性和可行性。主要結(jié)果如下：1從汕頭港和南澳島海水養(yǎng)殖區(qū)采集環(huán)境樣品，篩選類固醇激素降解菌株39株，大多數(shù)菌株可以降解五種底物的34種，菌株X和Y3能夠降解本實驗用的全部底物，菌株N8和Y18只能降解雌二醇、N9和N12只降解膽固醇以及Y20只利用雌三醇。優(yōu)勢菌N1、N3和N6屬于Vibrio，菌株C、Y2分別為P.ganghwense和A.veianus。（1）從菌液濃度、總蛋白量、降解率及蛋白表達(dá)比較分析，證明菌株N1、N3

3、、N6和N13降解睪丸酮的能力。對具強(qiáng)降解睪丸酮、寬降解譜的菌株N3進(jìn)行降解睪丸酮的條件優(yōu)化和生理生化分析：（2）利用Plackett–Burman實驗和響應(yīng)面法中心復(fù)合設(shè)計（CCD）法，確定菌株N3降解睪丸酮的最佳條件為：起始pH為7.95、酵母提取物為68.06mgL1、氯化鈉為31.2gL1、硫酸銨為1.75gL1、溫度為25℃、磷酸氫二鉀為0.25gL1、葡萄糖為0.25gL1和轉(zhuǎn)速為150rpm。在最佳條件下，菌株的睪丸酮降解

4、率與模型預(yù)測相符。（3）菌株N3為革蘭氏陰性細(xì)菌，有運(yùn)動性，進(jìn)行發(fā)酵型產(chǎn)酸，不能利用色氨酸生成吲哚，不能利用檸檬酸鈉為碳源，不含有丙酮酸脫羧酶。菌株對高濃度(150?gml1)的氨芐青霉素、羧芐青霉素、青霉素、壯觀霉素和低濃度的鏈霉素、萘嚀酮酸、卡那霉素有抵抗作用，對低濃度的氯霉素、四環(huán)素和利福平敏感。結(jié)合16SrRNA基因序列進(jìn)化樹分析，將菌株命名為Vibriosp.N3。2柘林灣網(wǎng)箱魚排養(yǎng)殖區(qū)篩選雌酮和雌二醇降解菌：（1）篩選得到雌