AP-2相互作用蛋白的篩選及鑒定.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子AP—2是一個(gè)功能重要的家族，在哺乳動(dòng)物的胚胎發(fā)育過程中，其表達(dá)受到嚴(yán)格的時(shí)空調(diào)控，參與多種組織和器官的細(xì)胞分化和形態(tài)發(fā)生，如神經(jīng)脊、顱面部、四肢、軀干部、心臟和腎臟的發(fā)育。目前AP—2家族有五個(gè)成員被鑒定出來，分別是AP—2α、AP—2β、AP—2γ、AP—2δ和AP—2（）。這些成員都能以同源或異源二聚體的形式結(jié)合于保守的DNA序列5’—GCCNNNGGC—3’。 AP—2α和AP—2β是AP—2家族中兩個(gè)較早被克隆和研究較

2、多的兩個(gè)成員。其功能不僅表現(xiàn)為胚胎發(fā)育中的重要調(diào)控子，還通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控下游靶基因參與多個(gè)生理過程的調(diào)節(jié)，包括了細(xì)胞生長，分化，癌變和凋亡等。作為一個(gè)多功能的調(diào)控因子，AP—2α和AP—2β有多個(gè)協(xié)同作用的蛋白伙伴。為了找到更多的與AP—2α和AP—2β相互作用的蛋白因子，本文采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法，篩選AP—2α和AP—2β潛在的相互作用蛋白。
　　 在小鼠的前脂肪細(xì)胞3T3L—1細(xì)胞中，篩選得到了五個(gè)新的AP—2α潛在

3、相互作用蛋白，這其中就包括了如Acadl這種與脂肪代謝相關(guān)的蛋白。另外在人的HEK293FT細(xì)胞中篩選出兩個(gè)新的AP—2β潛在相互作用蛋白，其中一個(gè)是Stomatin like protein2(SLP—2)，SLP—2據(jù)現(xiàn)有研究報(bào)道很可能是個(gè)腫瘤相關(guān)基因。本論文重點(diǎn)研究了SLP—2與AP—2β的相互作用。我們克隆了SLP—2的基因，用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)了外源過表達(dá)和內(nèi)源的SLP—2蛋白都能與AP—2β蛋白相互作用。而且，細(xì)胞免疫熒光實(shí)